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原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團或單個細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

大鼠腦靜脈血管平滑肌分離自腦靜脈組織；與腦動脈相比，腦靜脈管壁較薄。與身體其他部位的靜脈不同，腦靜脈管壁中沒有靜脈瓣，靜脈血的回流依賴高位的勢能。腦靜脈血的回流路徑可以歸納為：大部腦靜脈血經(jīng)腦深部靜脈和腦血竇流入頸內(nèi)靜脈；小部腦靜脈血經(jīng)眼部翼狀靜脈叢，進入靜脈導(dǎo)血管再到頭皮，最后流入椎管中的椎旁靜脈系統(tǒng)。腦靜脈系統(tǒng)有大量交通枝靜脈叢，即使兩側(cè)頸內(nèi)靜脈都被阻塞，大腦靜脈血仍可經(jīng)椎靜脈和頸外靜脈系統(tǒng)完成其回流。腦靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠腦靜脈血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠腦靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA 試劑盒 96T/48T

One pit protein Caveolin1 (Cav-1) ELISA Kit 人窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit 豬髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforAlpha-GST(HumanAlpha-glathioneS-ansferases)ELISAKit人αS轉(zhuǎn)移酶規(guī)格：48T/96T

血液結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Plagrowthhormone,GHELISAKit植物生長激素(GH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬雌激素(E)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬雌二醇(E2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬傳染性胃腸炎病毒抗體（TGEV）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1A(SREBP-1A)ELISA試劑盒 ，英文名： SREBP-1A ELISA Kit

Rabbit type III procollagen (P III NP) ELISA Kit 兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒

破傷風(fēng)芽孢梭菌(CT)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-13(HumanMaixmetalloproteinase13)ELISAkit人基質(zhì)金屬蛋白酶13規(guī)格：48T/96T

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-3)活性比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitET-1犬內(nèi)皮素1規(guī)格：48T/96T

PRLR重組小鼠 PRLR / Prolactin receptor 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(LRP1)重組蛋白 Recombinant Low Density Lipoprotein Receptor Related Protein 1 (LRP1)

ATP5D重組人 ATP5D 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ANP32A Protein Human 重組人 ANP32A / PHAP1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

TNFSF8 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

大鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞5-LOX (5-lipoxygenase 0.5mg5-LOX (5-lipoxygenase) 5-脂氧合酶抗原

ANP32A Protein Human 重組人 ANP32A / PHAP1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

PGLYRP1重組小鼠 PGLYRP1 / PGRP-S 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

IL1R2 Protein Rat 重組大鼠 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白 (His 標(biāo)簽)

BLOC1S2重組人 BLOC1S2 / BLOS2 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein