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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠膀胱成纖維細胞

商品屬性：

細胞簡介：

大鼠膀胱成纖維分離自膀胱組織；膀胱是一個儲尿器官，在哺乳類動物，它是由平滑肌組成的一個囊形結(jié)構(gòu)，位于骨盆內(nèi)，其后端開口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三層組織組成，由內(nèi)向外為黏膜層、肌層和外膜。肌層由平滑肌纖維構(gòu)成，稱為逼尿肌，逼尿肌收縮，可使膀胱內(nèi)壓升高，壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌，形成尿道內(nèi)括約肌。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分為三層：即漿膜層（蜂窩脂肪組織）、肌肉層（逼尿肌、膀胱三角區(qū)?。┖宛つ樱O薄的一層移行上皮組織）。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的膀胱成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。膀胱成纖維細胞分泌的生長因子是一種具有多功能的促有絲分裂原，研究已表明其參與惡性腫瘤的形成過程。近年來，堿性成纖維細胞生長因子在膀胱癌發(fā)病過程中的作用、與生物學(xué)行為之間的關(guān)系以及治療上的應(yīng)用已受到重視。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠膀胱成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠膀胱成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴(yán)格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Collagen II (HCB II) ELISA Kit 人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA試劑盒

PorcineEpinephrine/Adrenaline,EPIELISAKit 豬(EPI)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforALT/GPT(HumanAlanineAminoansferase)ELISAKit人轉(zhuǎn)氨酶/谷轉(zhuǎn)氨酶規(guī)格：48T/96T

血液活化10(FACTORXa)活性熒光定量檢測試劑盒20次

PlaVitaminB12,VB12ELISAKit植物B12(VB12)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬氧化酶(DAO)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬端粒酶(TE)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒 ，英文名： Bcl-2 ELISA Kit

Rabbit tissue factor pathway inhibitor (TFPI) ELISA Kit 兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒

Mouseierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit 小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforhumaoll-likereceptor2,TLR2ELISAKit人toll樣受體2規(guī)格：48T/96T

通用型血液酶1(PON1)有機0酸酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

大鼠癌標(biāo)志物-CA153ELISAKit大鼠癌標(biāo)志物-CA153ELISAKit，48T/96T大鼠癌標(biāo)志物-CA153ELISAKit，48T/96T規(guī)格：48T/96T

HA重組甲型流感 H5N1 (A/goose/Guiyang/337/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

SDF-1/CXCL12 (stromal cell derived factor-1 0.5mgSDF-1/CXCL12 (stromal cell derived factor-1) 基質(zhì)細胞衍生因子-1(抗原)

TNFRSF17重組人 TNFRSF17 / BCMA / CD269 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

APCDD1 Protein Human 重組人 APCDD1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IL1RN Protein Human 重組人 IL-1RA / IL1RN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

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APCDD1 Protein Human 重組人 APCDD1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/goose/Guiyang/337/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

IL1RN Protein Human 重組人 IL-1RA / IL1RN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

TNFRSF17重組人 TNFRSF17 / BCMA / CD269 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein