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原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠下腔靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

大鼠下腔靜脈內(nèi)皮分離自下腔靜脈組織；下腔靜脈是體內(nèi)大的靜脈，收集下肢、盆部和腹部的靜脈血。下腔靜脈由左、右髂總靜脈匯合而成，匯合部位多在第5腰椎水平，少數(shù)平第4腰椎。下腔靜脈位于脊柱的右前方，沿腹主動脈的右側(cè)上行，經(jīng)肝的腔靜脈溝、穿 膈的腔靜脈孔，開口于右心房。下腔靜脈的前面有肝、胰頭、十二指腸水平部、右睪丸動脈及小腸系膜根越過。后面為有膈腳、第1～4腰椎、有腰交感干和腹主動脈的壁支。右側(cè)與 腰大肌、右腎、右腎上腺相鄰，左側(cè)為腹主動脈。下腔靜脈的屬支有髂總靜脈、右睪丸靜脈、腎靜脈、右腎上腺靜脈、肝靜脈、膈下靜脈和腰靜脈，其中大部分 屬支與同名動脈伴行。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠下腔靜脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠下腔靜脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機(jī)"，這時有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human creatine kinase (CK) ELISA Kit 人肌酸激酶(CK)ELISA試劑盒

RabbitD-Dimer,D2DELISAKit 兔子D二聚體(D2D)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforai-RVIgG(Humanai-rubellavirusIgGaibody)ELISAKit人抗風(fēng)疹病毒IgG抗體規(guī)格：48T/96T

血液3-羥-3-甲戊二酰(HMG-COA)還原酶活性間接比色法定量檢測試劑盒20次

PorcineInsulin,INSELISAKit豬胰島素(INS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豬胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豬胰島素(INS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豬血小板活化因子(PAF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒 ，英文名： APC ELISA Kit

Rabbit Leptospira IgG (Lebtospira) ELISA Kit 兔鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒

腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)核酸檢測試劑盒 48T

CLIAKitforMouseneurofilameprotein,NFELISAKit小鼠神經(jīng)絲蛋白規(guī)格：48T/96T

體液(GLATHIONE)總濃度熒光定量檢測試劑盒50次

ELISAKitColⅡ人Ⅱ型膠原規(guī)格：48T/96T

KYNU重組小鼠 KYNU / Kynureninase 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

TGFβ誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1(TIEG1)重組蛋白 Recombinant TGF Beta Inducible Early Response Gene 1 (TIEG1)

RUVBL1重組人 RUVBL1 / RVB1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

BLK Protein Human 重組人 BLK / B Lymphocyte Kinase 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

MET Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白

大鼠下腔靜脈內(nèi)皮細(xì)胞C4結(jié)合蛋白β(C4BPβ)重組蛋白 Recombinant C4 Binding Protein Beta (C4BPb)

BLK Protein Human 重組人 BLK / B Lymphocyte Kinase 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

ADAM15重組小鼠 ADAM15 / MDC15 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

DLL1 Protein Rat 重組大鼠 DLL1 / Delta-like 蛋白 1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

LILRA3重組人 ILT6 / LILRA3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein