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原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開(kāi)始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過(guò)程中見(jiàn)消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開(kāi)的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。

大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠子宮內(nèi)膜上皮分離自子宮組織；子宮是孕育胎兒的器官，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會(huì)陰中心腱等結(jié)構(gòu)維持，這些結(jié)構(gòu)受損或松弛時(shí)，可以引起子宮脫垂。子宮內(nèi)膜即黏膜，由上皮（屬單層柱狀上皮，有分泌細(xì)胞和纖毛細(xì)胞二種）和固有膜（由結(jié)締組織構(gòu)成，其內(nèi)有大量的星形細(xì)胞，稱(chēng)為基質(zhì)細(xì)胞）組成，子宮內(nèi)膜可分為淺表的功能膜和深部的基底層，功能層較厚，約占內(nèi)膜厚度的4/5；基底層較薄較致密，約占1/5，功能層可剝脫，而基底層不可剝脫。子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞主要功能：①子宮內(nèi)膜亦稱(chēng)子宮黏膜，是指構(gòu)成哺乳類(lèi)子宮內(nèi)壁的一層；②子宮內(nèi)膜對(duì)動(dòng)情素和孕激素都起反應(yīng)，因此可隨著性周期（發(fā)情周期、月經(jīng)周期）發(fā)生顯著的變化。子宮內(nèi)膜與胚胎附植密切相關(guān)，在生殖生理的研究中占重要地位。在胚胎與母體“對(duì)話"的過(guò)程中，子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞充當(dāng)了極其重要的角色。子宮內(nèi)膜構(gòu)成雌性哺乳動(dòng)物子宮壁的內(nèi)層，位于子宮腔面，在動(dòng)物生殖生理活動(dòng)中占有重要地位。子宮和子宮內(nèi)膜是維持雌性動(dòng)物生理功能和生育能力的重要器官，子宮內(nèi)膜的再生修復(fù)是子宮的重要生理功能。體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠子宮內(nèi)膜上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠子宮內(nèi)膜上皮采用先膠原酶消化、后組織貼塊法，結(jié)合上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來(lái)的細(xì)胞。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，從機(jī)體分離出來(lái)到傳代之前的細(xì)胞稱(chēng)為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長(zhǎng)短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，稱(chēng)為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來(lái)的有限細(xì)胞系、無(wú)限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱(chēng)為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類(lèi)多、價(jià)格便宜、無(wú)限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問(wèn)題。

公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：

鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai prothrombin aibody (aPT1/aPT2) ELISA Kit 人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒

HumanInsulieceptorβ,ISR-βELISAKIT 人胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforACV-A(MouseActivinA)ELISAKit小鼠活化素A規(guī)格：48T/96T

血液組織蛋白酶L(CATHEPSINL)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

MouseProgesterone,PROGELISAKit小鼠孕激素/孕同(PROG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5   英文名稱(chēng)：   human Insulin like Growth Factor Binding Protein 5   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   IGFBP5

胰島素   英文名稱(chēng)：   Human Insulin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   INS

細(xì)胞間粘附分子1   英文名稱(chēng)：   Human Iercellular Adhesion Molecule 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   ICAM-1

干擾素α受體   英文名稱(chēng)：   Human Ierferon α Receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   IFNαR

大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA試劑盒 ，英文名： CBS ELISA Kit

Rabbit collagen type III (Col III) ELISA Kit 兔子Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒

百日咳桿菌(BP)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T

CLIAKitforMMP-2/GelatinaseAELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A規(guī)格：48T/96T

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)免疫捕獲檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitPSA犬前列腺特異性抗原規(guī)格：48T/96T

HGF重組大鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白 Protein

EpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule 0.5mgEpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule) 上皮細(xì)胞粘附分子/表皮細(xì)胞粘附分子抗原

IL23重組人 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

CALML3 Protein Human 重組人 CALML3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

LTA4H Protein Mouse 重組小鼠 Leukotriene A4 Hydrolase / LTA4H 蛋白 (His 標(biāo)簽)

大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞EpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule 0.5mgEpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule) 上皮細(xì)胞粘附分子/表皮細(xì)胞粘附分子抗原

CALML3 Protein Human 重組人 CALML3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HGF重組大鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白 Protein

LTA4H Protein Mouse 重組小鼠 Leukotriene A4 Hydrolase / LTA4H 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IL23重組人 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein