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原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴(yán)格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

人腎臟微血管內(nèi)皮細胞

商品屬性：

細胞簡介：

人腎臟微血管內(nèi)皮分離自腎臟；腎臟是人體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水分及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進行。腎臟內(nèi)部的結(jié)構(gòu)，可分為腎實質(zhì)和腎盂兩部分。在腎縱切面可以看到，腎實質(zhì)分內(nèi)外兩層：外層為皮質(zhì)，內(nèi)層為髓質(zhì)。腎皮質(zhì)位于腎實質(zhì)表層，富含血管，新鮮時呈紅褐色，由一百多萬個腎單位組成。每個腎單位由腎小體和腎小管所構(gòu)成，部分皮質(zhì)伸展至髓質(zhì)錐體間，成為腎柱。腎髓質(zhì)位于腎皮質(zhì)的深面，血管較少，色淡紅，為10-20個錐體所構(gòu)成。腎錐體在切面上呈三角形。錐體底部向腎凸面，向腎門，錐體主要組織為集合管，錐體稱腎乳頭，每一個乳頭有10-20個乳頭管，向腎小盞漏斗部開口。在腎竇內(nèi)有腎小盞，為漏斗形的膜狀小管，圍繞腎乳頭。腎錐體與腎小盞相連接。每腎有7～8個腎小盞，相鄰2～3個腎小盞合成一個腎大盞。每腎有2～3個腎大盞，腎大盞匯合成扁漏斗狀的腎盂。腎盂出腎門后逐漸縮窄變細，移行為輸尿管。腎單位是腎臟結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。腎小體包括腎小球和腎小囊。腎小體內(nèi)有一個毛細血管團，稱為腎小球，腎小球是個血管球。它由腎動脈分支形成。腎小球外有腎小囊包繞。腎小囊分兩層，兩層之間有囊腔與腎小管的管腔相通。腎小管匯成集合管。若干集合管匯合成乳頭管，尿液由此流入腎小盞。微血管又稱毛細血管。分布于各種組織和細胞間的最微細的血管。介于微動脈和微靜脈之間。平均直徑7～9微米，數(shù)量極多，成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細胞及一薄層基膜組成，厚約0.5微米?；ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織，其中有纖維細胞、巨噬細胞和周細胞等。最細的毛細血管由一個內(nèi)皮細胞圍成管腔，較粗的毛細血管由2～3個內(nèi)皮細胞圍成。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的毛細血管，內(nèi)皮細胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃），稱連續(xù)毛細血管；分布于內(nèi)分泌腺、腎臟等處的毛細血管，除有縫隙連接外，細胞本身有許多小孔，（孔徑800～1000埃），稱有孔毛細血管；分布于肝、脾、骨髓及某些內(nèi)分泌腺的毛細血管，管腔擴大，稱血竇。毛細血管的管壁薄、通透性大、管徑細（8～10微米）、數(shù)量多、血流速度慢，這些特點使其成為血液與組織液進行物質(zhì)交換的場所，又稱交換血管。血竇（sinusoid）由毛細血管管腔擴大而成，竇壁的一般結(jié)構(gòu)與毛細血管壁相同，由單層內(nèi)皮細胞構(gòu)成，內(nèi)皮細胞膜上有窗孔。不同器官的竇壁結(jié)構(gòu)各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細胞間有較寬裂隙；肝血竇內(nèi)皮細胞是不連續(xù)的，有較寬的細胞隙（0.1～0.5微米）；肝、脾血竇的基膜不完整或無基膜，通透性比毛細血管大，較大的蛋白質(zhì)和血細胞可以通過。肝血竇壁內(nèi)有枯否細胞，脾血竇內(nèi)外有巨噬細胞，這兩種細胞都有吞噬能力，可吞噬清除血液中的異物、細菌等有害物質(zhì)，是機體單核巨噬細胞系統(tǒng)的重要組成分。某些內(nèi)分泌腺的血竇有連續(xù)的基膜。

方法簡介：

實驗室分離的人腎臟微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的人腎臟微血管內(nèi)皮采用膠原酶消化，結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

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Mousep53/tumorprotein,p53/TP53ELISAKit 小鼠p53(p53)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHSP-40ELISAKit大鼠熱休克蛋白40規(guī)格：48T/96T

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THPO重組人 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

信號素3F(SEMA3F)重組蛋白 Recombinant Semaphorin 3F (SEMA3F)

OBP2B重組人 OBP2B / Odorant-binding protein 2b 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

FCGR1 Protein Human 重組人 CD64 / FCGR1A 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Anhui/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

人腎臟微血管內(nèi)皮細胞信號素3F(SEMA3F)重組蛋白 Recombinant Semaphorin 3F (SEMA3F)

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OBP2B重組人 OBP2B / Odorant-binding protein 2b 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。