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原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來(lái)的細(xì)胞。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，從機(jī)體分離出來(lái)到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長(zhǎng)短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

人小氣道上皮細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人小氣道上皮分離自小氣道；臨床上通常將內(nèi)徑小于2mm的小細(xì)支氣管稱為小氣道。小氣道具有氣流阻力小，但易阻塞的特點(diǎn)。在平靜吸氣時(shí)，空氣進(jìn)入狹窄的鼻咽部，產(chǎn)生渦流。由于小氣道已無(wú)軟骨支持，在脫離纖維鞘嵌入肺組織后，管腔通暢性不象軟骨性氣道，易于受胸腔的壓力變化的影響。小氣道上皮細(xì)胞形成連續(xù)呼吸道內(nèi)層，作為隔絕外界有害物質(zhì)的物理和功能屏障發(fā)揮著的作用。小氣道位于肺泡和氣管的交界處，這些細(xì)胞在功能上能夠調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、產(chǎn)生化學(xué)因子進(jìn)行宿主防御、表達(dá)粘附分子，并可能通過(guò)HLA-DR表達(dá)呈遞抗原；它們還能產(chǎn)生液體有助于肺液的平衡。許多呼吸道疾病，如哮喘、支氣管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化，都涉及呼吸道表面上皮細(xì)胞的破壞；小氣道上皮細(xì)胞的培養(yǎng)可為防止呼吸道擴(kuò)增疾病和重塑提供新的治療選擇。小氣道的生理功能特點(diǎn)：①小氣道阻力小；②氣流速度慢；③可調(diào)節(jié)控制通氣與血流比例。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人小氣道上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人小氣道上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來(lái)的有限細(xì)胞系、無(wú)限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類(lèi)多、價(jià)格便宜、無(wú)限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問(wèn)題。

公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：

小鼠戊糖素(Peosidine)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human Phosphoglucomase (PGM) ELISA Kit 人0酸葡萄糖變位酶(PGM)ELISA試劑盒

HumanAngiotensinaseELISAKit 人血管緊張肽酶(Angiotensinase)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenIerferonγ,IFN-γELISA試劑盒雞γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞ERBETA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次

Mouseglycogensyhasekinase,GSKELISAKit小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠纖維連結(jié)蛋白(mous FN)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

小鼠Fractalkine（mouse Fractalkine）   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

小鼠X(mouse FX)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

小鼠(mouse Fibrinogen)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISA 試劑盒

People leils binding type AFP / AFP Varia 3 (AFP-L3) ELISA kit E 人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)ELISA試劑盒E

Humanimmunoglobulinheavychain,IgHELISAKit 重鏈(IgH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanE1/ubiquitin-activatingenzyme,E1/UBAEELISA試劑盒人泛素激活酶(E1/UBAE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織PAK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

humanperoxisomeproliferativeactivatedreceptorgamacoactivator1alpha,PPARGC1ELISAKit人過(guò)氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

FGF1重組人 aFGF / FGF1 蛋白 Protein

結(jié)合球蛋白(CBG)重組蛋白 Recombinant Corticosteroid Binding Globulin (CBG)

SMR3B重組人 SMR3B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CDK1 Protein Human 重組人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

人小氣道上皮細(xì)胞結(jié)合球蛋白(CBG)重組蛋白 Recombinant Corticosteroid Binding Globulin (CBG)

CDK1 Protein Human 重組人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

FGF1重組人 aFGF / FGF1 蛋白 Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

SMR3B重組人 SMR3B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開(kāi)始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨谩Ｏ瘯r(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過(guò)程中見(jiàn)消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開(kāi)的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。