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原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長(zhǎng)短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔關(guān)節(jié)軟骨分離自關(guān)節(jié)軟骨組織；關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨，表面光滑、呈淡藍(lán)色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結(jié)締組織的膠原纖維構(gòu)成的基本框架，這種框架呈半環(huán)形，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下面的骨質(zhì)上，上端朝向關(guān)節(jié)面，這種結(jié)構(gòu)使關(guān)節(jié)軟骨緊緊與骨結(jié)合起來而不會(huì)掉下來，同時(shí)當(dāng)受到壓力時(shí)候，還可以有少許的變形，起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間，散在分布著軟骨細(xì)胞，軟骨細(xì)胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細(xì)胞組成，這些軟骨細(xì)胞維持關(guān)節(jié)軟骨的正常代謝。關(guān)節(jié)軟骨沒有神經(jīng)支配，也沒有血管，其營(yíng)養(yǎng)成分必須從關(guān)節(jié)液中取得，而其代謝廢物也必須排至關(guān)節(jié)液中，關(guān)節(jié)軟骨的這種營(yíng)養(yǎng)代謝必須通過關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)，使關(guān)節(jié)軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)對(duì)于維持關(guān)節(jié)軟骨的正常結(jié)構(gòu)起重要的作用。關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)。幼稚的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位于關(guān)節(jié)軟骨組織的表層，單個(gè)分布、體積較小、呈橢圓形，長(zhǎng)軸與關(guān)節(jié)軟骨表面平行，越向深層的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形，細(xì)胞核圓形或卵圓形、染色淺，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)，這些關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群。電鏡下，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔關(guān)節(jié)軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔關(guān)節(jié)軟骨采用膠原酶聯(lián)合消化制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每3-4天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價(jià)格便宜、無限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠酸脫氫酶E1(PDH E1) ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat hydroxyproline (Hyp) ELISA Kit 大鼠羥脯(Hyp)ELISA試劑盒

HumanPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit 人0酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanbonemorphogeneticproteins,BMPsELISA試劑盒人骨形成蛋白(BMPs)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物組織DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒20次

Humanstaphylococcusaureuseerotoxins,SEELISAKit人金葡菌腸毒素(SE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠雙酪酸（dityrosine）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠鼠總抗氧化能力(T-AOC)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠鼠病毒抗體（MPV-Ab）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠鼠病毒（MPV）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠順烏頭酸酶1(ACO1)ELISA試劑盒 ，英文名： ACO1 ELISA Kit

Mouse vitamin B12 (VB12) ELISA Kit 小鼠B12(VB12)ELISA試劑盒

Ratcyclicadenosinemonophosphate,cAMPELISAKit 大鼠環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHGFELISAKit大鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子規(guī)格：48T/96T

細(xì)胞SPRK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKit17-KS大鼠17-同類固醇規(guī)格：48T/96T

EPO重組大鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P 0.5mgHHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P) 人類皰疹病毒8抗原

MMP8重組人 MMP-8 / CLG1 蛋白 Protein

CKMT1A Protein Human 重組人 CKMT1A 蛋白 (His 標(biāo)簽)

TFRC Protein Mouse 重組小鼠 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 (His 標(biāo)簽)

兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P 0.5mgHHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P) 人類皰疹病毒8抗原

CKMT1A Protein Human 重組人 CKMT1A 蛋白 (His 標(biāo)簽)

EPO重組大鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

TFRC Protein Mouse 重組小鼠 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 (His 標(biāo)簽)

MMP8重組人 MMP-8 / CLG1 蛋白 Protein

原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨谩Ｏ瘯r(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。