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上海邦景實業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品： 進口elisa試劑盒，細胞株，細胞系，菌種 |
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更新時間：2022-05-19 11:04:15瀏覽次數(shù)：363
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商品屬性：
產(chǎn)品名稱：NK細胞
貨號：BJ-X97751
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
分類：免疫細胞及干細胞
商品介紹：
名稱 NK細胞 NK細胞，即自然殺傷細胞(Natural killer cell，NK)是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生，能夠識別靶細胞、殺傷介質(zhì)。 NK細胞確切的來源還不十分清楚，一般認為直接從骨髓中衍生，其發(fā)育成熟依賴于骨髓的微環(huán)境。小鼠和人的體外實驗表明，胸腺細胞在體外IL-2等細胞因子存在條件下培養(yǎng)也可誘導(dǎo)出NK細胞。小鼠脾臟在體內(nèi)IL-3誘導(dǎo)下可促進NK細胞的分化。NK細胞主要分布于外周血中，占PBMC5～10%，淋巴結(jié)和骨髓中也有NK活性，但水平較外周血低。 由于NK細胞具有部分T細胞分化抗原，如80～90%NK細胞CD2+，20～30%NK細胞CD3+（表達CD3ζ鏈），30%NK細胞CD8+（α/α）和75～90%NK細胞CD38+，而且NK細胞具有IL-2中親和性受體，在IL-2刺激下可發(fā)生增殖反應(yīng)，活化NK細胞可產(chǎn)生IFN-γ，因此一般認為NK細胞與T細胞在發(fā)育上關(guān)系更為密切。 與T細胞、B細胞相比，NK細胞表面標志的特異性是相對的。人NK細胞mIg-，部分NK細胞CD2、CD3和CD8陽性，表達IL-2受體β鏈(P75、CD122），CD11b/CD18陽性。常用檢測NK細胞的標記有CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94和LAK-1。 一種穩(wěn)定表達在NK和LAK細胞表面的LAK-1分子，120kDa，NK細胞在IL-2條件下培養(yǎng)20天LAK-1仍為陽性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。 NK細胞活化途徑： 1、通過CD3分子的ζ鏈 NK細胞不表達TCR/CD3復(fù)合物，但部分NK細胞表達CD3ζ鏈，當用CD16抗體刺激NK細胞活化時，ζ鏈發(fā)生磷酸化，引起胞漿內(nèi)Ca2+濃度升高，IP3水平增加，促進細胞因子合成和ADCC作用。 2、通過CD2分子 CD2與CD58相互作用或用CD2McAb刺激可活化NK細胞，CD3ζ鏈發(fā)生磷酸化。 3、自然殺傷細胞刺激因子 自然殺傷細胞刺激因子（natural killer cell stimulatory factor，NKSF)對NK細胞有刺激作用。 IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin，LR)對NK細胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用，體外培養(yǎng)時加入上述細胞因子可明顯提高NK的殺傷活性。前列腺素(PG)E1、E2、D2和腎上腺皮質(zhì)激素等對NK細胞的活性有抑制作用。 NK細胞表面具有IL-2中親和性受體，IL-2誘導(dǎo)NK的殺傷活性約需18-24小時。此外，IL-2還可誘導(dǎo)NK細胞的增殖，一般在刺激后3～4天開始發(fā)生增殖，其機理為IL-2可誘導(dǎo)NK細胞表達IL-2Rα鏈，新表達的α鏈與原先細胞表面的β鏈和γ鏈結(jié)合形成高親和性受體，在IL-2存在下刺激NK細胞發(fā)生增殖。IL-2誘導(dǎo)NK細胞的活性機理尚不清楚，可能與增加細胞粘附分子的表達，提高對NK抵抗靶細胞的殺傷活性有關(guān)，還可能增加NK細胞胞漿中的顆粒以及絲酯酶mRNA的表達，活化和促進殺傷介質(zhì)的殺傷作用。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：產(chǎn)品僅用于科研
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
發(fā)酵管5ml 30 支/盒 痤瘡桿菌
大球蓋菇 小皮傘
溶藻細菌 球孢鏈霉菌Streptomycesglobisporus
頂青霉 金鏈霉菌
改良馬丁培養(yǎng)基40ml 胰蛋白胨大豆瓊脂表面培養(yǎng)基(一)60mm檢測含碘、氯、過氧化物類的消毒劑的物表
雞單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡ-Ab)elisa分析檢測試劑盒
雞催乳素(PRL/LTH)elisa分析檢測試劑盒
雞促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)elisa分析檢測試劑盒
雞促卵泡素(FSH)elisa分析檢測試劑盒
雞促甲狀(TSH)elisa分析檢測試劑盒
NK細胞兔干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)elisa分析檢測試劑盒
兔干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)elisa檢測試劑盒
兔高密度脂蛋白HDLelisa檢測試劑盒
兔睪酮（Testoterone）elisa檢測試劑盒
兔鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)elisa分析檢測試劑盒
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
