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小鼠胚胎成纖維細胞傳代培養(yǎng)

2022-5-23  閱讀(820)

小鼠胚胎成纖維細胞傳代培養(yǎng):
一、原理 

  細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續(xù)生長,同時也將細胞數(shù)量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng))。   傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分   瓶。   
二、材料和試劑   

1、細胞:貼壁細胞株   

2、試劑:0.25%、1640培養(yǎng)基(含10%小牛血清)   

3、儀器和器材:倒置顯微鏡,培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等  
三、操作步驟  

 1、將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。   

2、加入0.5—1ml 0.25%溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。  

 3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。 觀察消化也可以用肉眼,當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。   

4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。   

附:消化液配制方法:   稱取0.25克蛋白酶(活力為1250),加入100mlCa2+、Mg2+Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4保存,用前可在37下回溫。   溶液中也可加入EDTA,使zui終濃度達0.02%。



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