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Taq DNA聚合酶具有的特點(diǎn)

2023-5-29  閱讀(929)

Taq DNA多聚酶是耐熱DNA聚合酶,是從水棲高溫菌(Thermus aquaticus)中分離的,由分子量為109000的一條多肽鏈構(gòu)成。dna聚合酶具有幾種功能:一是聚合作用,以DNA為模板,將dNTP中的脫氧單核苷酸逐個加到3’末端。二是有3’→5’外切酶活力,能識別和消除錯配的引物末端,與復(fù)制過程中校正功能有關(guān)。三是5’→3’外切酶活力,它能從5’端水解核苷酸,還能經(jīng)過幾個核苷酸起作用,切除錯配的核苷酸。在體外實(shí)驗(yàn)中,Taq DNA聚合酶的出錯率為10-4~10-5

Taq DNA聚合酶具有以下特點(diǎn):

1、耐高溫,在70℃下反應(yīng)2小時后其殘留活性在90%以上,在93℃下反應(yīng)2小時后其殘留活性是仍能保持60%,而在95℃下反應(yīng)2小時后為原來的40%。

2、在熱變性時不會被鈍化,故不必在擴(kuò)增反應(yīng)的每輪循環(huán)完成后再加新酶。

3、一般擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物長度可達(dá)2.0 kb,且特異性也較高。

一典型的PCR反應(yīng)約需的酶量為2.5u(總反應(yīng)體積為50ml時),濃度過高可引起非特異性擴(kuò)增,濃度過低則合成產(chǎn)物量減少。




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