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上海博湖生物科技有限公司
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ELISA實(shí)驗(yàn)中OD值偏低探討
2024-5-13 閱讀(301)
OD全稱optical density，也就是光密度，也可以稱為吸光度。吸光度指的是利用物質(zhì)有的吸收光譜，來鑒別物質(zhì)或者測(cè)定物質(zhì)的含量，也就是將一束特定波長(zhǎng)的光通過被檢測(cè)物，被檢測(cè)物可以將光吸收掉一部分，通過吸光度計(jì)算被檢測(cè)物的濃度。一般被檢測(cè)物濃度越高，吸光度的值就會(huì)越高。實(shí)驗(yàn)中也是利用“OD值”和被檢測(cè)物的濃度之間的關(guān)系來根據(jù)吸光度。
OD值是用酶標(biāo)儀測(cè)定的，其范圍一般在0-3之間，也有高于3.0的，其值的大小跟孔中顏色的深淺成比例，一般顏色深，OD值就比較高，另外ELISA所測(cè)定的OD值反應(yīng)的結(jié)果一般是一定稀釋度的抗體效價(jià)，如果你所用的抗體稀釋度很小，效價(jià)很高的話，其OD值是會(huì)很高的。
實(shí)驗(yàn)中OD值偏低情況分析：
第一種情況，整體的OD值偏低
可能情況分析：
1. 標(biāo)準(zhǔn)問題，標(biāo)準(zhǔn)濃度有沒有提高的潛力，標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方式等
2. 顯色試劑問題，顯色試劑是否新鮮，是否污染
3. 檢測(cè)抗體，檢測(cè)抗體效價(jià)是否OK，保存方法是否合適，稀釋液中不含有蛋白質(zhì)，基質(zhì)中有影響酶活的物質(zhì)等
4. 體系中是否有其他影響抗原抗體結(jié)合的物質(zhì)
5. 孵育條件是否正確
6. 洗滌不能過猛，洗滌過猛也可能會(huì)造成顯色偏低
第二種情況，標(biāo)準(zhǔn)曲線OK，樣本的OD值很低
情況概述：操作步驟全按照要求，樣本信息也適用，樣本類型血清，標(biāo)曲OK，但就是樣本的OD值很低，不在曲線范圍內(nèi)。
可能情況分析：
1. 一般標(biāo)曲OK，試劑盒基本沒有質(zhì)量問題，這個(gè)時(shí)候先去分析樣品和保存方法的原因。
2. 樣品是否新鮮，小愛之前看到很多論壇大咖建議用新鮮樣品檢測(cè)，將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后加入血清或血漿中檢測(cè)(也就是血清進(jìn)一步稀釋標(biāo)準(zhǔn)品)，觀察檢測(cè)結(jié)果，判斷是否是血清中有未知物質(zhì)影響。
3. 血清中成分復(fù)雜，標(biāo)準(zhǔn)蛋白的稀釋液成分簡(jiǎn)單，血清中可能有450nm顯色物質(zhì)與板底非特異結(jié)合，或者有些非特異結(jié)合抗體的蛋白，不能洗干凈，所以本底比標(biāo)準(zhǔn)樣品稀釋液高。
4. 適當(dāng)延長(zhǎng)顯色時(shí)間。
5. 更換酶標(biāo)儀，排除儀器原因。
6. 聯(lián)系我們，嘗試其他方法。
