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影響ELISA試劑盒質(zhì)保因素總結(jié)

2024-6-18  閱讀(348)

      市面上銷售的ELISA試劑盒種類繁多,不同指標(biāo)的檢測范圍及實驗方法不盡相同,甚至相同指標(biāo)不同廠家的試劑盒實驗方法都可能會不一樣。但基本原理都是一致的,是將可溶性的抗原或抗體吸附到(C8H8)n等固相載體上,進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量方法。ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實驗中比較常見的問題,現(xiàn)總結(jié)影響ELISA試劑盒質(zhì)保因素:
 1、方法學(xué)的影響
ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的bu公平競爭等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制。

 2、試劑因素
不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量致,即使是通過批批檢的項目其檢測結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性;對于效期短、使用率低的試劑,應(yīng)當(dāng)小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。

 3、樣本因素
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體等,后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。

 4、操作因素
ELISA操作步驟復(fù)雜,操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。

 5、灰區(qū)的設(shè)置
通常情況下,ELISA定性實驗以“陽性"和“陰性"來報告結(jié)果,兩者間有yi條分界線被稱為“陽性判斷值"(cut-off value,CO),這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。

 6、標(biāo)本復(fù)查
ELISA手工檢測過程復(fù)雜,影響因素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法,比如對HBsAg、HBeAgHCV-Ab、HIV-AbTP-Ab等項目的可疑、弱陽性標(biāo)本及少見模式的檢測結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。

 7、常表示結(jié)果的常用方法
      a.定性測定。
      b.半定量測定 結(jié)果yi般以滴度表示。
      c.定量測定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作系列稀釋后進(jìn)行ELISA測定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果以量或單位表示。



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