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冷凍細(xì)胞活化操作步驟

2024-11-25  閱讀(229)

細(xì)胞冷凍yell freexirig是保存微生物或動(dòng)植物細(xì)胞株的常用方法。冷凍細(xì)胞到底該如何活化,一個(gè)不小心,細(xì)胞就受損了。冷凍細(xì)胞活化的正確操作步驟:

1. 冷凍細(xì)胞之活化原則為快速解凍,以避免冰晶重新結(jié)晶而對細(xì)胞造成傷害,導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。

2. 細(xì)胞活化后,約需數(shù)日,或繼代一至二代,其細(xì)胞生長或特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。

3.步驟:

①操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套,防止冷凍管可能爆裂之傷害。

②自液氮或干冰容器中取出冷凍管,檢查蓋子是否旋緊,由于熱脹冷縮過程,此時(shí)蓋子易松掉。

③將新鮮培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫,回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之,移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。

④取出冷凍管,立即放入37 °C 水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化,以70%ethanol 擦拭保存管外部,移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。

⑤取出0.9 ml 解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)(稀釋比例為1:10~1:15),混合均勻, 放入CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。另取0.1 ml 解凍細(xì)胞懸浮液作存活測試。

⑥解凍后是否立即去除冷凍保護(hù)劑(例如DMSO 或glycerol),依細(xì)胞種類而異,一般而言,大都不需要立即去除冷凍保護(hù)劑。惟若要立即去除,則將解凍之細(xì)胞懸浮液加入含有5-10 ml 培養(yǎng)基之離心管內(nèi),離心1,000 rpm, 5 分鐘,移去上清液,加入新鮮培養(yǎng)基,混合均勻,放入CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

⑦若不需立即去除冷凍保存劑,則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。




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