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原代細胞的傳代培養(yǎng)方法步驟
2024-12-17 閱讀(201)
原代細胞是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養(yǎng)的細胞,稱為原代細胞。
一般認為,培養(yǎng)的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細胞生存、生長、繁殖和傳代,進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞I程等問題的研究。
那么關于原代細胞的傳代培養(yǎng),我們應該怎么做呢?一般有以下兩種方法：
一、貼壁細胞的消化法傳代
1、吸除或倒掉瓶內舊培養(yǎng)液。
2、加入1ml左右消化液(yi蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動培養(yǎng)瓶,使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進行觀察,發(fā)現(xiàn)原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時,棄去消化液,加入培養(yǎng)液終止消化。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸波,分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中,置37°C培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細胞的傳代
1、直接傳代
①讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3.
?、谟梦艽荡蛐纬杉毎麘乙汉?分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37*C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、離心法傳代
?、賹⒓毎B同培養(yǎng)液一并轉移到離心管內 ,離心800-1000rpm , 5分鐘。
?、谌コ锨?加新的培養(yǎng)液到離心管內,用吸管吹打使之形成細胞懸液。
?、蹖⒓毎麘乙悍謩e接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中,置37*C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
