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上海博湖生物科技有限公司
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ELISA包被的方式論述
2025-3-24 閱讀(48)
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）中的包被是將抗原或抗體固定到固相載體表面的關(guān)鍵步驟，通常使用聚苯乙烯微孔板作為載體。包被的方式包括直接包被和間接包被兩種：
直接包被：適用于天然蛋白和重組蛋白。將抗原或抗體溶液直接加入到微孔板中，通常在pH 9.0-9.6的碳酸鹽緩沖液中，室溫或4°C孵育過夜，以確保抗原或抗體充分吸附到載體表面。
間接包被：用于小分子抗原或不穩(wěn)定抗原。通過將小分子抗原偶聯(lián)到載體蛋白如牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)上，形成較大的復(fù)合物后再進(jìn)行包被，或采用間接捕獲法，先用特異性抗體包被，再通過抗原與抗體的結(jié)合實(shí)現(xiàn)固相化。
包被液的選擇也很關(guān)鍵，常見的有pH 9.6的碳酸鹽緩沖液和接近生理pH值的磷酸鹽緩沖液。包被的溫度一般在室溫(18-25°C)或4°C進(jìn)行，有時(shí)也可在37°C孵育2小時(shí)以加速反應(yīng)。包被濃度通常為10ug/ml-20ug/ml，具體需根據(jù)載體和包被物的性質(zhì)調(diào)整。包被完成后，為了封閉非特異性位點(diǎn)，防止后續(xù)步驟中的干擾，通常會使用牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉等封閉劑進(jìn)行封閉處理。封閉劑的選擇應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體需求和背景噪聲來確定。
