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蔗糖含量試劑盒(蒽酮比色法),微板法
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蔗糖含量試劑盒(蒽酮比色法),微板法
蔗糖是光合作用的主要產(chǎn)物,廣泛分布于植物體內(nèi),特別是甜菜、甘蔗和水果中含量*高。蔗糖由葡萄糖和糖脫水縮合形成

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 蔗糖(sucrose)含量(蒽酮比色法)試劑盒說(shuō)明書 (貨號(hào):G0506W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介: 蔗糖是光合作用的主要產(chǎn)物,廣泛分布于植物體內(nèi),特別是甜菜、甘蔗和水果中含量*高。蔗糖由葡萄糖和糖脫水縮合形成,易溶于水較難溶于乙醇。 在酸性條件下,將蔗糖水解生成果糖和葡萄糖,采用蒽酮比色法,生成的產(chǎn)物在 620nm 下有特征吸收峰,進(jìn)而計(jì)算出蔗糖的含量。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 1mL×1 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×2 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑×1 4℃保存 臨用前稱量取出2mg標(biāo)準(zhǔn)品至 一新EP管中,再加2mL蒸餾水 溶解即1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品,再用蒸 餾水稀釋一倍得0.5mg/mL蔗 糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液,備用(現(xiàn)配現(xiàn) 用,三天內(nèi)用完)。 三、所需儀器和用品: 酶標(biāo)儀、96 孔板、水浴鍋、移液器、研缽、常溫離心機(jī)、乙醇濃硫酸、蒸餾水。 四、蔗糖含量檢測(cè): 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 建議:選取樣本做幾個(gè)梯度的稀釋,選取適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù) D。 1、樣本制備 ① 組織樣本: 稱取 0.1g 樣本(若是干樣,如烘干煙葉等可取 0.05g;若是水分充足的樣本可取 0.2g), 先加入 0.8mL 80%乙醇(自備:取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸餾水中),冰浴勻漿,倒入 有蓋離心管中,再用 80%乙醇沖洗研缽并轉(zhuǎn)移至同一 EP 管中,使 EP 管中粗提液終體積 定容為 1.5mL(若用自動(dòng)研磨機(jī)可直接加入 1.5mL 80%乙醇研磨);置 50℃水浴 20min (封口膜纏緊,防止液體散失,且間隔 2min 振蕩混勻一次),冷卻后(若有損失,可加 80%乙醇補(bǔ)齊至 1.5mL),12000rpm,室溫離心 10min,取上清液備用。 ② 液體樣本: 澄清的液體樣本直接檢測(cè),若渾濁則需 12000rpm,室溫離心 10min,取上清液備用。 2、上機(jī)檢測(cè): ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 620nm。 ② 調(diào)節(jié)水浴鍋至 95℃,工作液的配制:臨用前在一瓶試劑二中加入 2.75mL 蒸餾水后, 緩慢加入 7.25mL 濃硫酸,充分溶解(若難溶解,70℃加熱溶解;剩余試劑 4℃保存 一周)。 ③ 上清液稀釋:可先取 2 個(gè)樣本預(yù)測(cè),確定適合本批樣本的稀釋濃度 D:葉片類樣 本可稀釋 10 倍,含糖量高的果肉類樣本可稀釋 20 倍左右。 ④ 在 EP 管中依次加入: 試劑(μL) 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管 (僅做一次) 空白管 (僅做一次) 樣本 20 標(biāo)準(zhǔn)品 20 蒸餾水 20 試劑一 10 10 10 務(wù)必混勻(可用槍吸打混勻),95℃煮沸 10min(蓋緊, 防止水分散失) 工作液 180 180 180 混勻,95℃水浴 10min(封口膜纏緊,防止水分散失), 冷卻至室溫后,取 200μL 轉(zhuǎn)移至 96 孔板中,于 620nm 讀取吸光值 A,ΔA=A 測(cè)定管-A 空白管。 【注】:如果ΔA 大于 1,需要將樣本用蒸餾水稀釋(嚴(yán)禁稀釋加熱反應(yīng)后的混合液, 否則會(huì)出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象),計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù) D五、結(jié)果計(jì)算: 1、按照重量計(jì)算: 蔗糖含量(mg/g 重量)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×ΔA÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =0.75×ΔA÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷W×D 2、按照體積計(jì)算: 蔗糖含量(mg/mL 液體)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×ΔA÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×D =0.5×ΔA÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D C 標(biāo)準(zhǔn)---蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品濃度,0.5mg/mLD---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1V---加入提取液體積,1.5mL; V1---加入樣本體積,0.02mL; W---樣本鮮重,g。



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