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上海雅吉生物科技有限公司

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人抗Q熱抗體(anti-Q-Ab)ELISA試劑盒如何讓使用?

2024-2-23  閱讀(58)

 

本試劑盒僅供研究使用。

                                                                     96T

 

使用目的:

本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中Q熱抗體(anti-Q-Ab)表達

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本人抗Q熱抗體(anti-Q-Ab)表達。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中Q熱抗體(anti-Q-Ab)相結合經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中人抗Q熱抗體(anti-Q-Ab)的存在與否。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

陽性對照

0.5ml×1

3

標包被

12孔×8

9

陰性對照

0.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

6ml×1

12

密封袋

1

標本要求 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

  1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

  2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

  3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

  4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

  7. 溫育:操作同3。

  8. 洗滌:操作同5。

  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

  10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

  11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

     

    計算和結果判定: 

      試驗有效性:陽性對照孔平均值1.00; 陰性對照平均值0.20

      臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

      陰性判定:樣品OD< 臨界值(CUT OFF)者為人抗Q熱抗體(anti-Q-Ab)陰性

      陽性判定:樣品OD 臨界值(CUT OFF)者為人抗Q熱抗體(anti-Q-Ab)陽性。

    注意事項

    1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

    2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    3濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

  12. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    5.底物請避光保存。

    6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

    7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。

    保存條件及有效期

    1試劑盒保存:2-8。

    2.有效期:6個月

 



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