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南京沃博生物科技有限公司

多抗 Protein A 純化具體步驟

時間:2023-6-20閱讀:1037

實驗試劑:

100mM ganansuan pH 2.5,1 M Tris-HCl pH 9.0,20 mM 磷酸鈉溶液(pH 7.0)、滅菌二級水、1×PBS、20% 乙醇

實驗步驟:

1.將血清進行離心,10000rpm、4℃離心 5 分鐘(兩遍),將上清取出放入干凈的 50 ml 離心管,丟棄沉淀。

2.從冰箱取出 ProA 柱,室溫放置幾分鐘。然后用 5 倍柱體積的二級水過柱,再用相同體積的 20mM 的磷酸鈉溶液(PH7.0)平衡柱子。

3.將離心好的上清過 ProA 柱。

4.待血清(余約 20ml)過柱完畢,用 10 倍柱體積的 20mM 的磷酸鈉溶液(PH7.0)洗柱

5.在 15ml 收集管中預(yù)先加入 0.2 倍柱體積即 0.4ml 的 1M Tris-Hcl(PH9.0),然后用 4 倍柱體積即 8ml 的 100mM 的ganansuan(PH2.5)洗脫柱子,并收集洗脫液

6.洗脫完畢,立即顛倒管子,將洗脫液與中和液混勻

對柱子的處理是:先用 3 倍柱體積的 100mM ganansuan(PH2.5)洗柱子,然后依次用 5倍柱體積的 20mM 的磷酸鈉溶液、5 倍柱體積的滅菌二級水、2 倍柱體積的 20%乙醇沖洗柱子,沖洗完畢后,再加入 2 倍柱體積的 20%的乙醇,蓋緊底帽,4 度保存柱子。



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