格式:甘油凍干

數(shù)量100µl

重組時，加入90 μ l的milliQ水。請注意:本品含有10%的甘油，表面可能為液體，但凍干后提供

凍干/復配保存于-20°C;請記住，在打開管子之前，要簡短地旋轉(zhuǎn)管子，以避免凍干材料粘在管帽或管邊可能發(fā)生的任何損失

Western blot (WB)

推薦的稀釋

標準曲線:推薦3種負載(0.5、2、4μl)。

對于大多數(shù)應用程序，0.2μg葉綠素的樣品負載將在這個范圍內(nèi)給出AtpB信號。

陽性控制:每孔負載:2μl負載是*的大多數(shù)化學發(fā)光檢測系統(tǒng)。

該標準是穩(wěn)定和準備，不需要加熱加載在凝膠。

請注意，本產(chǎn)品含有10%的甘油，可能看起來像液體，但是凍干后提供的。加水后讓產(chǎn)品溶解幾分鐘。每次使用前都要特別注意充分攪拌，因為冷凍后的蛋白質(zhì)更容易沉淀在更致密的層中。

預期|明顯MW

在大多數(shù)凝膠體系中，AtpB遷移在50-54 kDa左右

用4-12% NuPage (Invitrogen) LDS-PAGE分離AtpB蛋白標準品(AS03 030S) 0.03、0.1、0.26 pmol(1-3)和Agrisera protein Extraction Buffer (AS08 300)提取的木霉菌IMS 101總蛋白，用PVDF印跡1h。在20 mM Tris, 137 mM氯化鈉pH 7.6, 0.1% (v/v) tbs -20 (TBS-T)溶液中，在室溫攪拌條件下，用2%阻塞試劑轉(zhuǎn)移后立即阻塞。將印跡用稀釋1:50 000的一抗在室溫攪拌下孵育1h。將抗體溶液潷出，將印跡簡單沖洗兩次，然后在室溫下攪拌TBS-T中洗滌一次15分鐘，3次5分鐘。將印跡用二抗(抗雞IgY辣根過氧化物酶偶聯(lián))在2%的封閉溶液中稀釋至1:50 000，室溫攪拌1h。按照上述方法洗滌印跡，并按照生產(chǎn)商的說明，使用化學發(fā)光檢測試劑進行5分鐘的顯影。使用CCD成像儀和Quantity One軟件獲得印跡圖像，曝光時間為10秒。