ELISA檢測試劑盒操作步驟及注意事項

時間：2024/8/5閱讀：466

　　操作步驟：

　　1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；樣本孔加待測樣本50μL。

　　3、樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

　　4、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

　　5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。

　　6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7、每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

　　操作注意事項：

　　1、試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶全溶解后再使用。

　　2、實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。

　　3、濃度為0的S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

　　4、嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

　　5、所有液體組分使用前充分搖勻。

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