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胎牛血清注意事項(xiàng)的方法

時(shí)間:2020/11/25閱讀:1165
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胎牛血清注意事項(xiàng): 

熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過(guò)程中需有規(guī)則地?fù)u晃均勻。熱處理的目的是滅活血清中的補(bǔ)體(complement)。除非必須,一般不對(duì)血清進(jìn)行熱處理。因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量。補(bǔ)體參與的反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用、平滑肌細(xì)胞收縮、肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺、增強(qiáng)吞噬作用、促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化等。
瓶裝血清解凍需采用緩慢解凍法:把在-15 ~ -40℃低溫冰箱中保存的血清放入4℃冰箱中解凍約1天,待全部解凍后再分裝。在解凍過(guò)程中每隔約2小時(shí)可輕輕搖晃均勻(盡量避免產(chǎn)生氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃或更低 溫度進(jìn)入37℃水浴解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,從而使用血清的質(zhì)量下降。
血清中的絮狀沉淀物主要是解凍后血清中纖維蛋白及4℃長(zhǎng)時(shí)間保存后血清中的脂蛋白變性造成的,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量,可不用處理。如果必須要處理,可400g離心5分鐘去除。但不宜過(guò)濾去除,因?yàn)樾鯛钗锟赡茏枞麨V膜。

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胎牛血清操作程序:

    1. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。

    2. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。。

    3. 取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

    4.測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度值(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

    5.根據(jù)胎牛血清的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。 

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