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標(biāo)準(zhǔn)品原理:
本試劑盒系由預(yù)包被豬瘟病毒重組E2蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)豬血清、血漿樣本中豬瘟病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體。
標(biāo)準(zhǔn)品保存方法:
一、防蛻變:
1.防氧化:亞硫酸鈉、、均易被氧化,瓶口應(yīng)涂臘。
2.防碳酸化:硅酸鈉、過(guò)氧化鈉、苛性堿均易吸收二氧化碳,應(yīng)該涂臘。
3.防風(fēng)化:晶體碳酸鈉、晶體硫酸銅應(yīng)進(jìn)行臘封,存放在地下室中。
4.防分解:碳酸氫銨、濃硝酸受熱易分解,涂臘后,存放在地下室中。
5.活性炭能吸附多種氣體而蛻變,(木炭亦同),應(yīng)放在干燥器中。
6.黃磷遇空氣易自燃,永遠(yuǎn)保存水中,每15天查水一次:磷試劑瓶中加水、置于有水水糟中,上加鐘罩關(guān)閉。
7.鉀、鈉保存在火油中。
8.溶液中滴幾滴稀硫酸,加入過(guò)量細(xì)鐵粉,進(jìn)行臘封。
9.葡萄糖溶液容易霉變,稍加幾滴甲醛即可保存。
10.甲醛易聚合,應(yīng)開瓶后立即加少數(shù)甲醇;乙醛則加乙醇。
二、防光:
1.,濃硝酸及大部份有機(jī)藥品應(yīng)該放在棕色瓶中。
2.硝酸鹽存放在地下室中既防熱,又防光、防火還能防震。
3.有機(jī)試劑櫥窗一概用黑漆涂染。
4.實(shí)驗(yàn)室用色布窗布,內(nèi)紅外黑雙層。
標(biāo)準(zhǔn)品操作流程:
1. 整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
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