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腺病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒

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具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號50T

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時間:2020-09-29 11:30:13瀏覽次數(shù):113次

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腺病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒
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具體計算如下:
RNA溶于40 ?l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495?l的TE中,測得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 ?g/ml = 840 ?g/ml 或 0.84 ?g/?l
取5ul用來測量以后,剩余樣品RNA為35 ?l,剩余RNA總量為:35 ?l × 0.84 ?g/?l = 29.4 ?g
②純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% (12.3 M)。10×MOPS電泳緩沖液
濃度  成分
0.4M  MOPS,pH 7.0
0.1M  乙酸鈉
01M  EDTA
灌制凝膠板,預(yù)留加樣孔至少可以加入25 ?l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。
②準備RNA樣品
取3?gRNA,加3倍體積的甲醛上樣染液,加EB于甲醛上樣染液中至終濃度為10?g/ml。加熱至70℃孵育15分鐘使樣品變性。
③電泳
上樣前凝膠須預(yù)電泳5min,隨后將樣品加入上樣孔。5-6V/cm電壓下2h,電泳至溴酚蘭指示劑進膠至少2-3cm。
④紫外透射光下觀察并拍照
28S和18S核糖體RNA的帶非常亮而濃(其大小決定于用于抽提RNA的物種類型),上面一條帶的密度大約是下面一條帶的2倍。還有可能觀察到一個更小稍微擴散的帶,它由低分子量的RNA(tRNA和5S核糖體RNA)組成。在18S和28S核糖體帶之間可以看到一片彌散的EB染色物質(zhì),可能是由mRNA和其它異型RNA組成。RNA制備過程中如果出現(xiàn)DNA污染,將會在28S核糖體RNA帶的上面出現(xiàn),即更高分子量的彌散遷移物質(zhì)或者帶,RNA的降解表現(xiàn)為核糖體RNA帶的彌散。用數(shù)碼照相機拍下電泳結(jié)果。

客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。

產(chǎn)品名稱

 腺病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒

 英文名稱

 Adenovirus(AV)

 貨號

 XG01P3238

產(chǎn)品特點:
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強

 

注意事項:
1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶,影響實驗結(jié)果。
4. 建議擴增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴增效率佳。
5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

樣品RNA的抽提:

①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 ?g RNA/ml。樣品RNA濃度(?g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 ?g/ml。

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鎢99%Anti-MYL4antibody[EPR5337]

氧化鉍ARAnti-MYL4antibody[EPR5337]

氧化鉍SPAnti-MYL4antibody[EPR5337]

氧化鉍99.9%Anti-LeukotrieneA4hydrolase/LTA4Hantibody[EPR5713]

氧化鉍99.99%metalsbasisAnti-LeukotrieneA4hydrolase/LTA4Hantibody[EPR5713]

氧化鉍99.999%metalsbasisAnti-LeukotrieneA4hydrolase/LTA4Hantibody[EPR5713]

硒粉99.9%metalsbasis,200目Anti-TIP49Aantibody[EPR6028]

二氧化硒AR,99%Anti-TIP49Aantibody[EPR6028]

碲99.99%metalsbasisAnti-TIP49Aantibody[EPR6028]

4-二氨基吡99%Anti-NEK7antibody[EPR4900]

N-羥基鄰苯二酰亞胺98%Anti-NEK7antibody[EPR4900]

2-巰基-5-基-1,3,4-噻二唑99%Anti-NEK7antibody[EPR4900]

2-巰基苯并咪唑98%Anti-HPDantibody[EPR5297]

鄰苯二酰亞胺鉀99%Anti-HPDantibody[EPR5297]

異苯酯98%Anti-HPDantibody[EPR5297]
腺病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒順-5-降烯-外型-2,3-二酐95%RecombinantHumanTNNI1protein(denatured)

5,5'-二溴-2,2'-聯(lián)噻吩99%RecombinantHumanMGMTprotein

2,3-二溴噻吩98%RecombinantHumanOPRTprotein(denatured)

2,5-二溴-3-己基噻吩97%RecombinantMouseGM-CSFprotein

2,5-二溴-3-辛基噻吩96%Anti-Interferonbetaantibody

2,5-二溴-3,4-二硝基噻吩98%Anti-IP10antibody

2,5-二溴-3-十二烷基噻吩97%Anti-Interferongammaantibody

3-十二烷基噻吩98%Anti-Interferongammaantibody

2,5-二溴-3-基噻吩96%Anti-Neurofibrillarytanglesantibody

(1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵)二氯化鎳97%Anti-PER1antibody-N-terminal

1,2-雙(二苯基膦)烷氯化鎳98%Anti-H-ERGantibody

二苯基-2-吡膦97%Anti-Sulfotyrosineantibody[Sulfo-1C-A2]

2,7-二叔基芴98%Anti-HuR/ELAVL1antibody[4C8]

二苯并噻吩砜97%RatIgG2b,kappaMonoclonal[KLH/G2b-1-2](R-PE)-IsotypeControl

2,2’-二溴-9,9’-螺二芴95%RatIgG2b,kappamonoclonal[KLH/G2b-1-2](Cy5®)-IsotypeControl

樣品cDNA合成:
①反應(yīng)體系
序號  反應(yīng)物  劑量
1  逆轉(zhuǎn)錄buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  總體積  10μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
②混合液在加入逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV 之前先70℃干浴3分鐘,取出后立即冰水浴至管內(nèi)外溫度一致,然后加逆轉(zhuǎn)錄酶0.5μl,37℃水浴60分鐘。
③取出后立即95℃干浴3分鐘,得到逆轉(zhuǎn)錄終溶液即為cDNA溶液,保存于-80℃待用。

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