收到細(xì)胞如何處理？

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

      描述：(1)公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株；(2)細(xì)胞株數(shù)量約 5×105/瓶；(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項(xiàng)；3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮細(xì)胞株，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

8-Hydroxyquinoline sulfate;8-Quinophenol sulfate;Oxine sulfate;Quinosol;Chinosol醇中1,1,1-三氯乙烷溶液anti- ADAMDEC1 antibody人促胃液素受體(GsaR)ELISA試劑盒

Adenine sulfate醇中1,1,2,2-四氯乙烷溶液anti- ADAMTS12 antibody人膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)ELISA試劑盒

2-Nitroso-1-naphthol;1,2-Naphthoquinone-2-oxiMe;1,2-NaphthoquinoneiMine-2-oxiMe;C.I. 10010醇中1,1,2-三氯乙烷溶液anti- ADAMTSL4 antibody人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒

DL-Serine;DL-2-AMino-3-hydroxypropionic acid;DL-β-Hydroxyalanine;(±)-2-AMino-3-hydroxypropionic acid; DL-3-Hydroxy-α-alanine醇中1,2,3-三氯苯溶液anti- ADAP1 antibody人二醛(MDA)ELISA試劑盒

BSA醇中1,2,4-三基苯溶液anti- ADAP2 antibody人膽囊收縮素/腸促肽(CCK)ELISA試劑盒

Barbital;5,5-Diethyl-2,4,6(1H,3H,5H)-pyriMidinetrione;DiethylMalonylurea;Veronal;Malonal醇中1,3,5-三基苯溶液anti- ADAR1 antibody人Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒

1,4-Naphthoquinone;1,4-Dihydro-1,4-diketonaphthalene;α-Naphthoquinone正己烷中滅蟻靈溶液anti- ADARB1 antibody人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒

L-Cysteine;L-2-AMino-3-Mercaptopropanoic acid;L-α-AMino-β-thiopropionic acid;(R)-2-AMino-3-Mercaptopropionic acid;CyS醇中多氯聯(lián)苯溶液(Aroclor 1260)anti- ADAT1 antibody人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA試劑盒

3T3-L1小鼠脂肪細(xì)胞Human KLK6 (Kallikrein 6) ELISA Kit3號(hào)染色體開放閱讀框14抗體anti- PDGFRL antibody半乳糖凝集素7(GAL7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human KLK7 (Kallikrein 7) ELISA Kit3號(hào)染色體開放閱讀框20抗體anti- PDHA1 antibody半乳糖凝集素9(GAL9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human ARHGDIα (Rho GDP Dissociation Inhibitor Alpha ) ELISA Kit 3號(hào)染色體開放閱讀框23抗體anti- PDHA1 antibody半乳糖凝集素9(GAL9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human ARRβ1 (Arrestin Beta 1) ELISA Kit 3號(hào)染色體開放閱讀框31抗體anti- PDHB antibody半乳糖凝集素9(GAL9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human ARRβ2 (Arrestin Beta 2) ELISA Kit 3號(hào)染色體開放閱讀框32抗體anti- PDHX antibody半乳糖凝集素9(GAL9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human MANF (Mesencephalic Astrocyte Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit3號(hào)染色體開放閱讀框36抗體anti- PDI antibody半乳糖凝集素9(GAL9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human MAP2K1 (Mitogen Activated Protein Kinase Kinase 1) ELISA Kit3號(hào)染色體開放閱讀框38抗體anti- PDI antibody半乳糖凝集素9(GAL9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human AhR (Aryl Hydrocarbon Receptor) ELISA Kit3號(hào)染色體開放閱讀框55抗體anti- PDIA6 antibody載脂蛋白H(APOH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸，經(jīng)過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時(shí)停止其生命活動(dòng)，保存其活性，使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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