操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務(wù)標準。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

Benzyltributylammonium chloride化學(xué)需氧量-鉻（CODCr）（標樣）anti- CARS antibody人白細胞免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)ELISA試劑盒

TetraMethylaMMoniuM iodide化學(xué)需氧量-鉻（CODCr）（標樣）anti- CARTPT antibody人C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員E(CLEC4E)ELISA試劑盒

BENZYL ISOTHIOCYANATE化學(xué)需氧量-鉻（CODCr）（標樣）anti- Casein Kinase 1 delta antibody人假定蛋白LOC677168 ELISA試劑盒

HyaMine 1622;Quatrachlor;PheMerol chloride;PheMeride;PheMithyn;BenzethoniuM chloride Monohydrate;BenzyldiMethyl {2-[2-(p-1,1,3,3-tetraMethylbutylphenoxy)ethoxy]ethyl}aMMoniuM chloride;Diisobutylphe-noxyethoxyethyldiMethylbenzylaMMoniuM chloride Monohydr化學(xué)需氧量-鉻（CODCr）（標樣）anti- Casein Kinase 1 epsilon antibody人淋巴細胞抗原6復(fù)合物基因座A(Ly6a)ELISA試劑盒

1-Propanol; Propanol; Alcohol C3;亞硝酸鹽（以氮計)（標樣）anti- Casein Kinase 2 beta antibody人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員1(EAR1)ELISA試劑盒

1-Methoxy-2-propyl acetate鐵與錳混合標準品（標樣）anti- Casein Kinase 2 beta-specific antibody人混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域(MLKL)ELISA試劑盒

1-Ethoxy-2-propanol汞標準品 （標樣）anti- CASK antibody人過物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA試劑盒

Propionaldehyde苯胺（標樣）anti- CASP14 antibody人類似cDNA順序BC027382 ELISA試劑盒

成年小鼠心肌細胞Human FSA (Fetal Sulfoslycoprotein Antigen) ELISA Kit細胞表面趨化因子受體2A抗體anti- ROBO1-Specific antibody死骨片1(SQSTM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human EED (Embryonic Ectoderm Development) ELISA Kit 細胞表面趨化因子受體2B抗體anti- ROBO3 antibody胃內(nèi)因子(GIF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CTAGE (Cutaneous T-Cell Lymphocyte Associated Antigen) ELISA Kit細胞表面趨化因子受體9抗體anti- ROBO3-Specific antibody前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素1(PCSK1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human DPT (Dermatopontin) ELISA Kit煙型乙酰膽受體α4抗體anti- ROBO4-Specific antibody細胞維酸結(jié)合蛋白2(CRABP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human SRF/IF (Skin Reactive Factor/Inflammatory Factor) ELISA KitC-藻藍素/藻藍蛋白/藻青蛋白抗體anti- ROCK1 antibody驅(qū)動蛋白家族成員1A(KIF1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CLA/CTAGE (Cutaneous Lymphocyte Associated Antigen) ELISA Kit白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體anti- ROCK1-Specific antibody頭蛋白(NOG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human SYK (Spleen Tyrosine Kinase) ELISA KitCD19抗體anti- ROCK2 antibody載脂蛋白B100(APOB100)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human SMM (Smooth Muscle Myosin) ELISA Kit環(huán)氧合酶2/前列腺素內(nèi)過物合成酶2抗體anti- ROCK2-Specific antibody白介素25(IL25)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)