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當前位置:上海西格生物科技有限公司>>細胞培養(yǎng)>>原代細胞>> 大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細胞
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所 在 地上海市
更新時間:2020-10-21 15:19:50瀏覽次數(shù):118次
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大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細胞 | 5×105 | XG-X6596 |
產(chǎn)品描述:公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
公司產(chǎn)品采用干冰運輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.
4-Methylaminophenol sulfate轉基因BT63水稻種子粉基體標準物質anti- Cyclin H antibody大鼠熱休克蛋白47(HSP47)ELISA試劑盒
PyriMidine;1,3-Diazine;Miazine;M-Diazine轉基因BT63水稻種子粉基體標準物質anti- cyclin I antibody大鼠內(nèi)源性糖皮質激素(GC)ELISA試劑盒
MELIBIOSE轉基因BT63水稻種子粉基體標準物質anti- Cyclin T1 antibody大鼠檸檬酸合酶(CS)ELISA試劑盒
D(+)-Raffinose;Gossypose;Melitose;Melitriose;1,6-(α-Galactopyranosyl)-α-D-glucopyranosyl-β-D-fructofuranoside;(α-Galactosyl)sucrose牡蠣中無機元素和有機錫形態(tài)標準物質anti- Cyclon/CCDC86 antibody大鼠L-鼠乳酸脫酶(L-LDH) ELISA試劑盒
Jasmine flavourRoHS檢測X熒光分析用純銅合金中鉛成分anti- Cyclophilin A antibody大鼠脂酰合成酶(ACS)ELISA試劑盒
PICROTOXIN倍硫亞砜anti- Cyclophilin A antibody大鼠肉脂酰轉移酶(CACT)ELISA試劑盒
Papain硫anti- Cyclophilin B antibody大鼠酸化酰羧化酶(pACCase)ELISA試劑盒
NA拌砜anti- Cyclophilin B antibody大鼠金屬硫蛋白(MT)ELISA試劑盒
大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細胞Proteus mirabilis HauserELAVL4蛋白抗體anti- ST5 antibody6(KLK6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Homo sapiens, humanRAB6蛋白抗體anti- ST6GAL1 antibody嗜鉻蛋白B(CHGB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Raffaelea hennebertii Scott et du Toit皮卡丘素抗體anti- ST6GAL1 antibody胰島素樣生長因子酸不穩(wěn)定亞基(IGFALS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Escherichia coli (Migula) Castellani and Ch ..表皮生長因子樣激素受體1anti- ST6GALNAC1 antibody血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..紅細胞膜蛋白4.2抗體anti- ST6GALNAC5 antibody雙特異性酸酶6(DUSP6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..轉錄因子ELYS蛋白抗體anti- ST6GALNAC6 antibodyNodal同源物(NODAL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..內(nèi)皮細胞受體蛋白激酶A2+A3+A4抗體anti- ST7 antibodyNei內(nèi)切核酸酶Ⅷ樣蛋白1(NEIL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..酸化內(nèi)皮細胞受體蛋白激酶A2+A3+A4抗體anti- ST7L antibody黑素瘤細胞黏附分子(MCAM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
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