操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng)；3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

CALCIUM TRIFLUOROMETHANESULFONATE巖石熱解標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- DLG1 antibody大鼠細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒

POTASSIUM TRIFLUOROMETHANESULFONATE純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- DLG3 antibody大鼠細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒

Scandium trifluoromethanesulfonate煙煤物理特性和化學(xué)成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- DLG5 antibody大鼠髓脂性蛋白(MBP)ELISA試劑盒

LANTHANUM TRIFLUOROMETHANESULFONATE水中鉀，鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液anti- DLGAP3 antibody大鼠種胎兒球蛋白/胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒

Lithium triflate電導(dǎo)率溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- DLK1 antibody大鼠前列腺酸性酸酶(PAP)ELISA試劑盒

MAGNESIUM TRIFLUOROMETHANESULFONATE鈦溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- DLK2 antibody大鼠游離前列腺特異性抗原(fPSA)ELISA試劑盒

Sodium trifluoromethanesulfonate濁度標(biāo)準(zhǔn)溶液（無(wú)）anti- DLL1-Specific antibody大鼠前列腺特異性抗原(PSA)ELISA試劑盒

NEODYMIUM(III) TRIFLUOROMETHANESULFONATE納氏試劑anti- DLL4 antibody大鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA試劑盒

人膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..酸化酸神經(jīng)膜抗體anti- TBXAS1 antibodyⅤ型膠原α2(COL5α2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

frozen酸化DNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體anti- TC10 antibody細(xì)胞色素P450家族成員1A2(CYP1A2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Rhodobacter sphaeroides (van Niel) Imhoff e ..細(xì)絲蛋白A抗體anti- TCEA1 antibodyC1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白9(C1QTNF9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, humanDNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體anti- TCEA3 antibody角蛋白16(KRT16)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

frozen酸化載脂蛋白A1抗體anti- TCEAL7 antibody層粘連蛋白γ1(LAMγ1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, human細(xì)胞外基質(zhì)蛋白FRAS1抗體anti- TCEB1 antibodySmad同源物2(Smad2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

freeze-dried叉頭蛋白N1抗體anti- TCEB2 antibody神經(jīng)外營(yíng)養(yǎng)蛋白1(NXPH1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體anti- TCEB3 antibody唾液酸酶2(SIAL2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)