操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物【Human Coronary Artery: Normal Aortic Endothelial cells Derivatives】
人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物是從人原代冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞提取的，人原代冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞從正常人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮組織制備。正常人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

Cobalt chloride硅單晶電阻率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EIF2B2 antibody大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒

Lithium chloride硅單晶電阻率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EIF2B3 antibody大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒

Magnesium chloride硅單晶電阻率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EIF2B4 antibody大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒

Tin(Ⅱ)chloride anhydrous顯微鏡光度計(jì)用反射率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EIF2C1-Specific antibody大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒

1,4-Diazacyclohexane顯微鏡光度計(jì)用反射率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EIF2C3-Specific antibody大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)ELISA試劑盒

Ruthenium trichloride中國(guó)系列標(biāo)準(zhǔn)海水a(chǎn)nti- EIF2S1 antibody大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒

Ferric chloride中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)海水a(chǎn)nti- EIF2S2 antibody大鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒

Sodium selenate煤物理性質(zhì)和化學(xué)成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EIF2S3 antibody大鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒

人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物Homo sapiens, human巖藻糖轉(zhuǎn)移酶2抗體anti- TNF-alpha antibody翻譯調(diào)節(jié)腫瘤蛋白1(TPT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, human免疫球蛋白A Fc段受體1抗體anti- TNFR1 antibody成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9(FGF9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..脂肪酸延長(zhǎng)酶抗體anti- TNFR1 antibody纖維膠凝蛋白1(FCN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

frozen酸化雷帕霉素靶蛋白抗體anti- TNFR2 antibody整合素β6(ITGβ6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..叉頭蛋白O3A抗體anti- TNFRSF13B antibody核糖核酸酶A(RNASE1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

frozen叉頭蛋白M1抗體anti- TNFRSF6B antibody脂肪酸合酶(FASN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, human纖維束1抗體anti- TNFSF12 antibody汗酸酶αL(IDUα)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..FAS凋亡抑制分子3抗體anti- TNFSF13 antibody促凋亡蛋白1(APOPT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)