操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

大鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取物【Rat Intestine: Normal Small Intestinal Smooth Muscle Cell Derivatives】
大鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取物是從大鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取的，大鼠小腸平滑肌細(xì)胞從正常大鼠小腸組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠小腸平滑肌組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中

1-(2-Hydroxyethyl)imidazole27種VOC混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HORMAD1 antibodyToll樣受體4(TLR4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1-(4-AMINOPHENYL)ETHANOL27種VOC混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HOXA11 antibody天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

N-(CYANOMETHYL)PYRIDINIUM CHLORIDE27種VOC混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HOXA2 antibody天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1-(TERT-BUTOXYCARBONYL)-2-PYRROLIDINONE27種VOC混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HOXA9 antibody轉(zhuǎn)錄激活因子5(ATF5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1,2,3,4-Butanetetracarboxylic acid23種揮發(fā)性混合物 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HOXB1 antibody白介素17F(IL17F)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1,3-Dibromo-5,5-dimethylhydantoin21種鹵代烴混標(biāo)（HJ645-2013環(huán)境空氣，濃度和方法上的濃度一致anti- HOXB1 antibody血小板激活因子酰水解酶2(PAFAH2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1,1,3,3-Tetramethoxypropane21種鹵代烴混標(biāo)（HJ645-2013環(huán)境空氣 揮發(fā)性鹵代烴的測(cè)定) 標(biāo)anti- HOXB7 antibody血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(VEGFR1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1,12-Dodecanediamine48種半揮發(fā)性有機(jī)物混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HOXC10 antibodySalusinβ蛋白(Salusinβ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

大鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取物Penicillium roqueforti Thom酸化白介素-1受體相關(guān)激酶4抗體Chicken FGA(Fibrinogen Alpha) ELISA Kit四旋蛋白5(TSPAN5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..IQCJ蛋白抗體Chicken IgM(Immunoglobulin M) ELISA Kit四旋蛋白4(TSPAN4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Ganoderma fornicatum (Fries) Patouillard抑制素結(jié)合蛋白抗體Chicken LZM(Lysozyme LZM) ELISA Kit四旋蛋白2(TSPAN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Mus musculus, mouse免疫球蛋白超家族成員3抗體Chicken SAA(serum amyloid A) ELISA Kit鐵氧還蛋白還原酶(FDXR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Malbranchea arcuata Sigler et Carmichael免疫球蛋白超家族成員6抗體Chicken a1AGP(Alpha-1-Acid Glycoprotein) ELISA Kit脂筏特征蛋白1(FLOT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Verticillium dahliae Klebahn免疫球蛋白超家族成員9抗體Chicken TRF(Transferrin) ELISA Kit矢車菊苷β1(CENTβ1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Cryphonectria parasitica (Murrill) Barr, te ..免疫球蛋白超家族成員10抗體Chicken IGF-1(Insulin-like growth factor 1) ELISA Kit矢車菊苷β2(CENTβ2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Kodamaea ohmeri (Etchells et Bell) Yamada e ..大腦和丸特異性免疫球蛋白超家族成員11抗體Chicken Estrogen ELISA Kit矢車菊苷γ1(CENTγ1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)