收到細(xì)胞如何處理？

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

大鼠角膜上皮細(xì)胞提取物【Rat Eye: Normal Corneal Epithelial CellsDerivatives】
大鼠角膜上皮細(xì)胞提取物是從大鼠原代角膜上皮細(xì)胞提取的，大鼠原代角膜上皮細(xì)胞從正常大鼠眼組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠角膜上皮組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

N,N,N',N'-Tetramethyl-1,6-hexanediamine6種鄰苯二酸酯混標(biāo)（DEHP，BBP，DEP，DMP，DBP，DNOPanti- KCNIP1 antibody內(nèi)臟脂肪特異性蛋白酶抑制因子(Vaspin)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

N,N'-Ethylenebis(stearamide)6種鄰苯二酸酯混標(biāo)（DEHP，BBP，DEP，DMP，DBP，DNOPanti- KCNIP3 antibody原片段F1+2(F1+2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Sodium dimethyldithiocarbamate7種鄰苯二酸酯（DEHP，BBP，DEP，DMP，DBP，DNOP，Danti- KCNIP4 antibodyβ-位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(βACE1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

N,N-DIMETHYL-M-PHENYLENEDIAMINE DIHYDROCHLORIDE7種鄰苯二酸酯（DEHP，BBP，DEP，DMP，DBP，DNOP，Danti- KCNJ1 antibody次黃嘌呤酸核糖基轉(zhuǎn)移酶1(HPRT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

N,N-Dimethyloctadecylamine7種鄰苯二酸酯（DEHP，BBP，DEP，DMP，DBP，DNOP，Danti- KCNJ15 antibody葡萄糖6酸脫酶(G6PD)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

N,N-Dimethylpropionamide對(duì)二氨基聯(lián)苯 標(biāo)準(zhǔn)品anti- KCNJ3 antibody蛋白酶1(PRSS1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1,1-DiisopropoxytrimethylamineMethod 604混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- KCNJ5 antibody酸烯醇式酮酸羧激酶1(PCK1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1-Dimethylamino-2-propanol4種苯胺混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- KCNK18 antibody心脂合酶(CLS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

大鼠角膜上皮細(xì)胞提取物Pichia membranifaciens Hansen鉀離子通道蛋白EAG1抗體Human ACO1(Aconitase 1) ELISA Kit高爾基體蛋白A5(GOLGA5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Micrococcus luteus (Schroeter) CohnKi67蛋白抗體Human STAT5A(Signal transducer and activator of transcription 5A) ELISA Kit高爾基體蛋白A6(GOLGA6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Marchandiomyces lignicola Lawrey et Diederi ..ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2抗體Human STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) ELISA Kit高爾基體蛋白A7(GOLGA7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Venturia pyrina AderholdG蛋白偶聯(lián)受體54抗體Human SHH(Sonic hedgehog protein) ELISA Kit甘油酸-O-?；D(zhuǎn)移酶(GNPAT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Klin ..驅(qū)動(dòng)蛋白家族KIF17抗體Human NFKBIA(NF-kappa-B inhibitor alpha) ELISA Kit甘胺酸-N-?；D(zhuǎn)移酶(GLYAT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..轉(zhuǎn)錄因子KLF9抗體Human APOC3(Apolipoprotein C-III) ELISA Kit脫酶2(GLUD2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Dictyostelium australe Cavender et al.KLF樣轉(zhuǎn)錄因子8抗體Human PDGFD(Platelet-derived growth factor D) ELISA Kit酶2(GLS2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

frozen胞質(zhì)接頭蛋白Keap1抗體Human GAS6(Growth arrest-specific protein 6) ELISA Kit神經(jīng)膠質(zhì)蛋白(GLDN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸，經(jīng)過(guò)逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時(shí)停止其生命活動(dòng)，保存其活性，使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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