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當前位置:上海西格生物科技有限公司>>細胞培養(yǎng)>>細胞、組織提取物>> 人尿道組織提取物
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產(chǎn)品型號
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時間:2020-10-25 17:33:52瀏覽次數(shù):255次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線公司產(chǎn)品采用干冰運輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
人尿道組織提取物 | 詳見說明書 | XG-X6953 |
人尿道組織提取物【Human Ureter: Normal Lliac Artery Derivatives】
尿道是從膀胱通向體外的管道。男性尿道細長,長約18cm,起自膀胱的尿道內(nèi)口,上于尿道外口,行程中通過前列腺部、膜部和莖海綿體部,男性尿道兼有排尿和排精功能。女性尿道粗而短,長約5cm,起于尿道內(nèi)口,經(jīng)陰前方,開口于陰前庭。公司科技提供來自新鮮或冷凍人尿道組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準備的一條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人尿道組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
POLYDEOXYINOSINIC-DEOXYCYTIDYLIC ACID SODIUM SALT三苯基酸酯(酸三苯基酯) 標準品anti- LYSMD3 antibody血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
POLY(ALLYLAMINE HYDROCHLORIDE)十溴聯(lián)苯醚 標準品anti- Lysozyme antibody信號傳導轉(zhuǎn)錄激活因子2(STAT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
POE (20) ISOHEXADECYL ETHER己二酸二(2-基己)酯 標準品anti- LYVE1 antibodyCD5分子(CD5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
POLY(ETHYLENE GLYCOL) (N) MONOMETHACRYLATE四氯殺螨砜 標準品anti- LYZL1 antibody原(PK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Poly[2-methoxy-5-(2-ethylhexyloxy)-1,4-phenylenevinylene]四氯殺螨砜 標準品anti- LYZL4 antibody白介素21(IL21)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
EMERALDINE BASE POLYANILINE四氯殺螨砜 標準品anti- LYZL6 antibody轉(zhuǎn)化生長因子β刺激蛋白22(TSC22)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
POLY(STYRENESULFONIC ACID SODIUM SALT)滅菌丹 標準品anti- LZIC antibody歸巢關聯(lián)細胞黏附分子(HCAM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Poly(propylene glycol) dimethacrylate滅菌丹 標準品anti- LZTFL1 antibodyYAC-1細胞,淋巴瘤細胞
人尿道組織提取物Gloeosporium elasticae Cooke et Massee, ana ..細胞增殖誘導蛋白60(早老素相關蛋白)Human GPC3(Glypican-3) ELISA Kit錨定蛋白重復域蛋白1(ANKRD1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..線粒體載體同源蛋白2抗體Human FKBP5(Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP5) ELISA Kit角蛋白18(KRT18)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Mycobacterium kubicae Floyd et al.線粒體裂變調(diào)節(jié)蛋白1抗體Human PDE1A(Phosphodiesterase 1A) ELISA Kit雌激素受體β(ERβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..線粒體蛋白18抗體Human PXDN(Peroxidasin homolog) ELISA Kit5-羥色胺受體1A(HTR1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..減數(shù)分裂缺陷蛋白1抗體Human PDE7B(cAMP-specific 3',5’-cyclic phosphodiesterase 7B) ELISA Kit蕈型膽受體M3(CHRM3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
freeze-dried肌原調(diào)節(jié)抑制蛋白抗體Human PDZD2(PDZ domain-containing protein 2) ELISA Kit糖蛋白A33(GPA33)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Streptococcus equinus Andrewes and Horder雙微體2癌基因結(jié)合蛋白抗體Human CFI(Complement factor I) ELISA KitIL2誘導T細胞激酶(ITK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..微原纖維膠原相關蛋白1抗體Human PELO(Protein pelota homolog) ELISA KitCD5抗原樣蛋白(CD5L)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
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