收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

人體膽道癌組織提取物【Cancer: Human Biliary Tract Cancer Derivatives】
膽道癌包括肝門部膽道、肝總管、膽總管區(qū)域內的原發(fā)性癌腫，是指原發(fā)于左右肝管匯合部至膽總管下端的肝外膽道惡性腫瘤。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體膽道癌組織中高質量的總RNA，PCR準備的條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人體膽道癌組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

PENTAETHYLENEHEXAMINE酶2抗體anti- MNAT1 antibody抗SSB/La抗體(Anti-La)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2-Ethyl-5-phenylisoxazolium-3'-sulfonate醛固酮還原酶家族1成員C3抗體anti- MND1 antibody著絲粒蛋白E(CENPE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Glutaric anhydride促腎上腺皮質激素受體anti- MNDA antibody間隙連接蛋白43(CX43)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

CIMATEROL褐黑素相關蛋白ART抗體anti- MNK1 antibody踝蛋白(TLN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Diallyldisulfide腎上腺皮質線粒體鐵氧還蛋白抗體anti- MNS1 antibody鈣聯(lián)蛋白(CNX)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

ALLYLMAGNESIUM BROMIDE芳香烴受體核轉錄蛋白樣2抗體anti- MNT antibodyB-細胞激活因子受體(BAFFR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

CadMiuM selenide酸化芳香胺N-?；D移酶抗體anti- MOBKL1A antibody組蛋白H2A(H2A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

SE-METHYLSELENOCYSTEINE肌動蛋白結合蛋白1抗體anti- MOBKL1B antibody受體β(GLRβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

人體膽道癌組織提取物Aspergillus oryzae (Ahlburg) CohnA型流感-NS1抗體（神經(jīng)氨酸酶1）Human RBP1(Retinol-binding protein 1) ELISA Kit17-β-羥基類固醇脫酶10(HSD17β10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..高度相似的細胞周期蛋白激酶NEK6抗體Human RBL1(Retinoblastoma-like protein 1) ELISA Kit肌鈣蛋白I(TNI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..9號染色體開放閱讀框156抗體Human TMPRSS4(Transmembrane protease serine 4) ELISA Kit周期素依賴性激酶5(CDK5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Aspergillus penicillioides Spegazzini, anam ..酸化細胞核因子抗體Human MCPIP(Monocyte Chemoattractant Protein-induced Protein 1) ELISA Kit補體1q(C1q)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human酸化受體2A+2B抗體Human TAS2R38(Taste receptor type 2 member 38) ELISA KitN-基-D-天氡氨酸離子能受體2C(GRIN2C)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..膜內在蛋白NOD26抗體Human CALCA(Calcitonin gene-related peptide 1) ELISA KitN-基-D-天氡氨酸離子能受體2B(GRIN2B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Psychromonas japonicaI/膜相關的蛋白質HEM2抗體Human ZNRF2(Zinc and ring finger 2) ELISA Kit鞘氨醇-1-酸酸酶2(SGPP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

dried酸化DNA修復蛋白NBS1抗體Human TRPV1(Transient receptor potential cation channel subfamily V member 1) ELISA Kit半連接酶(GCLM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

公司產(chǎn)品采用干冰運輸，經(jīng)過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時停止其生命活動，保存其活性，使您的實驗更生動,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

公司產(chǎn)品采用干冰運輸，經(jīng)過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時停止其生命活動，保存其活性，使您的實驗更生動,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.