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當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>細(xì)胞、組織提取物>> 小鼠大隱靜脈組織提取物
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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2020-10-26 20:23:36瀏覽次數(shù):169次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 環(huán)保在線公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時(shí)停止其生命活動(dòng),保存其活性,使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
小鼠大隱靜脈組織提取物 | 詳見說明書 | XG-X7000 |
小鼠大隱靜脈組織提取物【Mouse Vascular : Normal Saphenous Vein Derivatives】
大隱靜脈是長的靜脈,靜脈血管壁薄、內(nèi)腔大,內(nèi)膜折疊形成靜脈瓣。靜脈瓣一般成對(duì)排列,呈半月狀小袋,袋口朝向心,利于靜脈回流,防止血液逆流。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠大隱靜脈組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠大隱靜脈組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
GADOLINIUM NITRATE HEXAHYDRATE早老素穩(wěn)定因子樣蛋白/γ分泌酶組件蛋白APH1抗體anti- MOGAT1 antibody白介素1受體拮抗劑(IL1RA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Holmium(III) nitrate pentahydrate肌縮側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白1抗體anti- MOGAT2 antibody嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子4(NCF4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
GALLIUM(III) NITRATE HYDRATEβ淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體(X11β)anti- MOGAT2 antibody多功能肽酶2(LMP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Rhodium(III) nitrate酰結(jié)合蛋白抗體anti- MOK antibody尾加壓素2受體(UTS2R)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
NEODYMIUM NITRATE HEXAHYDRATE脂肪醛脫酶抗體anti- MOK antibody尾加壓素2受體(UTS2R)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
ZIRCONYL NITRATE腺相關(guān)病5 VP1抗體anti- MORC1 antibodyGATA結(jié)合蛋白1(GATA1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
YTTERBIUM NITRATE, PENTAHYDRATE抗利尿激素1A抗體anti- MORF4L1 antibodyGATA結(jié)合蛋白2(GATA2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
INDIUM NITRATE抗利尿激素受體1B抗體anti- MORF4L2 antibodyGATA結(jié)合蛋白5(GATA5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
小鼠大隱靜脈組織提取物frozen核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白3抗體Human ADSL(Adenylosuccinate lyase) ELISA Kit鞘氨醇-1-酸酸酶1(SGPP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Alternaria eureka Simmons干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子NANOGP8抗體Human RRM2(Ribonucleoside-diphosphate reductase subunit M2) ELISA KitⅥ型膠原α1(COL6α1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Metanophrys diminuta Gomez-Saladin and Scha ..核因子1X抗體Human CA50(CarbohydRate Antigen 50) ELISA Kit神經(jīng)調(diào)節(jié)素2(NRG2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Aspergillus flavus Link肉豆蔻?;D(zhuǎn)移酶2-N端肽抗體Human GAST(Gastrin) ELISA Kit小異二聚體伴侶(SHP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Mus musculus, mouse乳腺癌細(xì)胞分化因子P45抗體 HeregulinβHuman DUSP4(Dual specificity protein phosphatase 4) ELISA Kit吲哚胺2,3-雙加氧酶2(IDO2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Streptococcus australis Willcox et al.突觸細(xì)胞粘附分子1抗體Human Appbp2(Amyloid protein-binding protein 2) ELISA Kit酰膽酯酶(BCHE)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
freeze-dried核孔糖蛋白P62抗體Human ANK1(Ankyrin-1) ELISA Kit基CpG結(jié)合蛋白2(MECP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Pleurotus ostreatus (Jacquin : Fries) Kumme ..NCK銜接蛋白2抗體Human ANTXR1(Anthrax toxin receptor 1) ELISA Kit興奮性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(EAAT3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
收到細(xì)胞如何處理?
1、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
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