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所 在 地上海市
更新時間:2020-10-26 20:25:39瀏覽次數(shù):187次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線公司產(chǎn)品采用干冰運輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
大鼠小腦組織提取物 | 詳見說明書 | XG-X7069 |
大鼠小腦組織提取物【Brain: Normal Rat Cerebellar Derivatives】
小腦組織是位于大腦半球后方,參與軀體平衡和肌肉張力的調(diào)節(jié),以及隨意運動的協(xié)調(diào)。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠小腦組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準備的條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠小腦組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
Letrozole Related CoMpound A;4,4'-(1H-1,3,4-triazol-1-ylMethylene)dibenzonitrile骨形態(tài)發(fā)生蛋白11抗體anti- NOTCH3 antibodyS100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
LevetiracetaM表皮生長因子反應蛋白2抗體anti- NOV antibodyS100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
LevetiracetaM RaceMic MixtureBax相互作用因子1抗體anti- NOVA2 antibodyP選擇素(SELP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
LevetiracetaM Related CoMpound A;(S)-N-(1-aMi-oxobutan-2-yl)-4-chlorobut*巴爾得-別德爾綜合征相關蛋白12抗體anti- antibodyⅠ型膠原(COL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
LevetiracetaM Related CoMpound B;(S)-2-aMinobut* hydrochlorideBTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體anti- NOX2 antibodyⅠ型膠原(COL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Levocarnitine Related CoMpound A;3-carboxy-N,N,N-triMethyl-2-propen-1-aMiniuM chlorideBTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體anti- NOX3-Specific antibody6(VB6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
LevofloxacinBTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體anti- NOX4 antibodyⅡ型膠原(COL2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
LevonorgestrelBTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白19抗體anti- NOX5 antibodyⅡ型膠原(COL2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
大鼠小腦組織提取物EGTA 二醇雙(2-氨基基醚)四酸PCID1蛋白抗體Human S100A8(Protein S100-A8) ELISA Kit纖連蛋白試劑盒
D-Biotin D-PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK6蛋白抗體Human S100A9(Protein S100-A9) ELISA Kit纖連蛋白試劑盒
Cordycepin 蟲草素吡哆醛激酶抗體Human CA1(Carbonic anhydrase 1) ELISA Kit纖調(diào)蛋白試劑盒
Fluorescein diacetate(FDA) 二酸熒光素PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK1蛋白抗體Human NMS(Neuromedin-S) ELISA Kit細小病B19試劑盒
EB Eraser強力EB去除劑 前列腺癌激活蛋白抗體Human IL32(Interleukin-32) ELISA Kit細胞周期素A2試劑盒
DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(無DNase、RNase ) PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK4蛋白抗體Human NMU(Neuromedin-U) ELISA Kit細胞周期蛋白依賴性激酶2試劑盒
iFluorTM 555 phalloidin iFluor™ 555標記鬼筆環(huán)肽(橘色)PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK7蛋白抗體Human Adamts4(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4) ELISA Kit細胞周期蛋白A1試劑盒
Digoxin PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK8蛋白抗體Human KSR2(Kinase suppressor of Ras 2) ELISA Kit細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子3試劑盒
收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
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