人體皮膚癌組織提取物【Cancer: Human Skin Cancer Derivatives】
皮膚癌是種發(fā)生于皮膚上的惡性腫瘤之一，按病理組織學(xué)主要分為基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、惡性黑色素瘤、惡性淋巴瘤、特發(fā)性出血性肉瘤（Kaposi肉瘤）、汗腺癌、隆突性皮膚纖維肉瘤、血管肉瘤等，其中以基底細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌為常見(jiàn)。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍人體皮膚癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人體皮膚癌組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

cis-1,2-Diaminocyclohexane甘油酯激酶線(xiàn)粒體抗體anti- MINA antibody腫瘤壞死因子β(TNFβ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

CIS-2-BUTENE醛糖還原酶相關(guān)蛋白質(zhì)抗體anti- MINK1 antibody腫瘤壞死因子β(TNFβ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

2-Butene-1,4-diol血管生成素樣蛋白3抗體anti- MIOX antibody血小板生成素(TPO)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

CIS-2-PENTEN-1-OL丸酸性酸酶抗體anti- MIP antibody血小板生成素(TPO)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Diethyl maleate微絲相關(guān)蛋白1抗體anti- MIP-3-beta antibody型纖溶酶原激活因子(uPA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

CIS-STILBENE OXIDE自噬體ATG16L2蛋白抗體anti- MIP-3α antibody型纖溶酶原激活因子受體(uPAR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

CIS-DECAHYDRO-1-NAPHTHOL 99腺苷A1A受體抗體anti- MIPEP antibody細(xì)胞間粘附分子5(ICAM5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

CIS-4,7,10,13,16,19-DOCOSAHEXAENOIC ACID ETHYL ESTER芳基硫酸酯酶B抗體anti- MIPOL1 antibody細(xì)胞間粘附分子5(ICAM5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

人體皮膚癌組織提取物Cryptococcus albidus (Saito) Skinner var. ..生殖細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白NA抗體Human B3GALT2(Beta-1,3-galactosyltransferase 2) ELISA Kit微精蛋白β(MSMβ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..同源盒蛋白NOBOX抗體Human DNM2(Dynamin-2) ELISA Kit跨膜蛋白酶2(TMPRSS2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Mus musculus, mouse轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)蛋白NKX6.1抗體Human C19orf80(Betatrophin) ELISA Kit腫廇蛋白P63(TP63)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..造血蛋白1抗體Human TWIST1(Twist-related protein 1) ELISA Kit腎酶(RNLS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..NFKB激活蛋白抗體Human TXK(Protein tyrosine kinase 4) ELISA Kitγ-內(nèi)啡肽(γEP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..NLE1蛋白抗體Human TXNDC5(Thioredoxin domain-containing protein 5) ELISA Kit低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5(LRP5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Yarrowia lipolytica (Wickerham et al.) van ..骨巢蛋白抗體Human SFRP1(Secreted frizzled-related protein 1) ELISA Kit抗原肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(TAP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體抗體Human BAI3(Brain-specific angiogenesis inhibitor 3) ELISA Kit心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

培養(yǎng)步驟：

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。