操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

大鼠腎足突基底膜組織提取物【Kidney: Normal Rat Kidney Foot Process Basement Membrane Derivatives】
腎足突基底膜是腎小球過濾膜的一部分，組成濾膜的中層。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠腎足突基底膜組織中高質量的總RNA，PCR準備的條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠腎足突基底膜組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

Human sCD14 (Soluble Cluster of Differentiation14) ELISA KitBarX1蛋白抗體anti- Nucleoside phosphorylase antibody細胞胱硫醚γ裂解酶(CSE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human FcεRII/CD23 (Receptor II for the Fc Region of Immunoglobulin E) ELISA KitBcl-2同源結構域樣蛋白1抗體anti- Nucleostemin antibody胰島素降解酶(IDE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CD40L/TNFSF5 (Cluster of Differentiation 40 Ligand) ELISA Kit染色體相關蛋白CAP抗體anti- NUDC antibody氧鯊烯環(huán)化酶(OSC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CD163 (Cluster of Differentiation 163) ELISA Kit骨/軟骨蛋白多糖1抗體anti- NUDCD2 antibody氧鯊烯環(huán)化酶(OSC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human GP39 (Glycoprotein 39, Cartilage) ELISA Kit嗜乳脂蛋白亞家族2成員A2抗體anti- NUDCD3 antibodyα-乳清蛋白(αLA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CLU (Clusterin) ELISA Kit凱爾血型糖蛋白CD238抗體anti- NUDT10 antibody泛素(Ub)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CNTF (Ciliary Neurotrophic Factor) ELISA Kit 血型抗原前體蛋白抗體anti- NUDT11 antibody白介素17(IL17)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human TF (Tissue Factor) ELISA Kit乳腺癌易感基因2和p21蛋白抑制因子抗體anti- NUDT12 antibody垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(ADCYAP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

大鼠腎足突基底膜組織提取物Amphotericin B Solution (2.5 mg/ml in DMSO) 孕激素受體β（MPRβ）抗體Human IL-36A(Interleukin-36 alpha) ELISA Kit脫氧尿三酸試劑盒

1×TE Buffer 1×TE緩沖液前列腺素F2a受體抗體PGF2αRHuman CFB(Complement factor B) ELISA Kit脫氧核糖核酸酶Ⅰ試劑盒

5×TBE Buffer 5×TBE緩沖液神經(jīng)叢蛋白B3抗體Human IL-36B(Interleukin-36 beta) ELISA Kit脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉試劑盒

10×TBE Buffer 10×TBE緩沖液/蛋白激酶PCTK2抗體Human CCR6(C-C chemokine receptor type 6) ELISA Kit脫表雄酮硫酸酯試劑盒

0.5M EDTA（pH 8.0）酸二酯酶7抗體Human NPEPPS(Puromycin-sensitive aminopeptidase) ELISA Kit脫表雄酮試劑盒

50×TAE Buffer 50×TAE溶液酸二酯酶7B抗體Human PYY3(Putative peptide YY-3) ELISA Kit脫-γ-羧基原試劑盒

Luciferase Reporter Gene Assay Kit 螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒 先天性眼外肌纖維化相關蛋白FEOM2抗體Human UNC13C(Protein unc-13 homolog C) ELISA Kit褪黑素試劑盒

Low Melting Point Agarose 低熔點瓊脂糖神經(jīng)母細胞瘤蛋白PHOX2B抗體Human PLA2R1(Secretory phospholipase A2 receptor) ELISA Kit突觸泡蛋白抗體試劑盒