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當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR檢測(cè)試劑盒>> 50T佩氏著色霉PCR檢測(cè)試劑盒
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產(chǎn)品型號(hào)50T
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時(shí)間:2020-11-03 10:49:49瀏覽次數(shù):105次
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一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
本試劑盒不但準(zhǔn)確、快速、靈敏,還具有以下特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單。
2. 預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 494 bp。
3. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Fonsecaea pedrosoiPCR |
貨號(hào) | XG-P1442 |
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
包裝規(guī)格及成分:
編號(hào) | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽(yáng)性對(duì)照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見(jiàn)下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊(cè) | 400 uL(紅蓋) |
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
脫纖維羊血50ml每HB025ml脫纖維羊血
Andrade氏糖類肉湯 Andrade’s Carbohydrate Broth 用于細(xì)菌的糖發(fā)酵試驗(yàn)
MH 湯(MHB) Mueller-Hinton Broth 250 用于抗生素敏感試驗(yàn)
蔗糖胰蛋白胨肉湯白糖250g/瓶用于致病性嗜水氣單胞菌的斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)incubationmedia蔗糖胰蛋白胨肉湯白糖250g/瓶用于致病性嗜水氣單胞菌的斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)
改良麥康凱瓊脂添加劑 1ml*5支 每支添加于200ml HB0121-3中Tributyl(vinyl)tin 三丁基基錫 7486-35-3
TIN(II) TRIFLUOROMETHANESULFONATE *烷磺酸錫 62086-04-8
Diflubenzuron 除蟲(chóng)脲 35367-38-5
TETRAMETHYLTIN 四甲基錫 594-27-4SPG21 Others Mouse 小鼠 SPG21 / ACP33 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
KM小鼠子瘤株;U27
CM-M025小鼠外周血白細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細(xì)胞 癌細(xì)胞,MDA-MB-157細(xì)胞 Ana-1(鼠巨噬細(xì)胞)
小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞;DCS
AGT Others Human 人 AGT / SerpinA8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
佩氏著色霉PCR檢測(cè)試劑盒NaClNutrientAgar
AHMMedium
MCP瓊脂 MCP Agar 250 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的計(jì)數(shù)和培養(yǎng)(Acumedia 方法)
BPLS瓊脂250g/瓶用于樣本中沙門(mén)氏菌的選擇性分離incubationmediaBPLS瓊脂250g/瓶用于樣本中沙門(mén)氏菌的選擇性分離
我妻氏血瓊脂平板(9cm) 10個(gè)/包 用于神奈川現(xiàn)象試驗(yàn)石蠟油 進(jìn)口分裝 大鼠巨嗜細(xì)胞炎性蛋白-1(rat MIP-1)
七水 進(jìn)口分裝 大鼠神經(jīng)元烯醇化酶(rat NSE)
DNA Ladder-H1-K, 即用型 進(jìn)口分裝 大鼠前列環(huán)素(rat PGI)
DNA Marker C, (即用型) 進(jìn)口分裝 大鼠性激素結(jié)合球蛋白(rat SHBG)IFNA5 Others Rat 大鼠 IFNA5 / IFNaG 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
雜交瘤(B類);C3110D2E11
人前列腺成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
Calu-6細(xì)胞,人退行性癌細(xì)胞 克雷伯肺炎桿菌 敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21
CXCL12 Protein Canine 重組狗 CXCL12 / SDF-1 蛋白
NCI-H1299(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng),無(wú)非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
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