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行業(yè)產(chǎn)品
當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR檢測(cè)試劑盒>> 50TPCR檢測(cè)試劑盒
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產(chǎn)品型號(hào)50T
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時(shí)間:2020-11-03 10:50:37瀏覽次數(shù):246次
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一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
本試劑盒不但準(zhǔn)確、快速、靈敏,還具有以下特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單。
2. 預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 494 bp。
3. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Fusarium moniliformeVPCR |
貨號(hào) | XG-P1460 |
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
包裝規(guī)格及成分:
編號(hào) | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽(yáng)性對(duì)照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見(jiàn)下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊(cè) | 400 uL(紅蓋) |
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
梭菌屬測(cè)定用培養(yǎng)基250g用于梭菌屬細(xì)菌檢測(cè)
甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂 Toluidine Blue DNAse Agar 用于核糖核酸酶檢測(cè)
C.L.E.D 培養(yǎng)基 C.L.E.D Medium 250 用于尿液中微生物的選擇性分離培養(yǎng)(OXOID方法)
梭菌增菌培養(yǎng)基250g/瓶用于梭菌的增菌培養(yǎng)incubationmedia梭菌增菌培養(yǎng)基250g/瓶用于梭菌的增菌培養(yǎng)
SimmonsCitrateAgar3-Chloropropyne 3- 624-65-7
D-(+)-Cellobiose D-纖維二糖 528-50-7
Cyclopropyl acetylene 環(huán)丙乙炔 6746-94-7
STACHYOSE TETRAHYDRATE 水蘇四糖 10094-58-3PROK1 Others Human 人 EG-VEGF / prokineticin-1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;Mao
CL-0404NCI-H596(人肺腺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
NRK-52E,大鼠腎細(xì)胞 Sars蛋白表達(dá)株,293sars181A細(xì)胞 NCI-H1703 [H1703](人肺癌細(xì)胞)
人前列腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PC-3M-2B4
BSG Others Mouse 小鼠 CD147 / EMMPRIN / Basigin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
PCR檢測(cè)試劑盒MUGMedium
厭氧瓊脂 250(g) incubation media 厭氧瓊脂 250(g)
胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ) Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base 250克 蠟樣芽孢桿菌的溶血測(cè)試驗(yàn)
培養(yǎng)基250用于彎曲桿菌耐受性試驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))incubationmedia培養(yǎng)基250用于彎曲桿菌耐受性試驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
42℃growthMedium維因(標(biāo)準(zhǔn)品) 進(jìn)口分裝 WI38/VA13(SV-40Z轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞)
N,N-二苯胺(standard for GC,≥99.5%(GC)) 進(jìn)口分裝 人肺腺癌細(xì)胞(胸膜滲出液)
鍶標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml) 進(jìn)口分裝 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
水硬度標(biāo)準(zhǔn)溶液(45.0mmol/l(以CaCO3計(jì)),基體:0.1mol/L HCl) 進(jìn)口分裝 人髓性紅白血病細(xì)胞CD4 Others Human 人 CD4 / LEU3 (aa 1-208) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞-懸浮生長(zhǎng)裂解物HOPC-os L
CAM191 EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞
CL-0094HCC827(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
正常細(xì)胞
人原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;293 Ad5 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng),無(wú)非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
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