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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線
產品名稱:赤點石斑魚神經壞死病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱:Redspotted Grouper Nervous Necrosis Virus(RGNNV)RTPCR
編號:XG-P2011
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規(guī)格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現,DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
改良CCD瓊脂基礎27382250g用于空腸彎曲菌的選擇分離培養(yǎng)(GB、ISO),每基礎培養(yǎng)基需添加劑
1401-prf MenCM-prf 腦膜細胞培養(yǎng)基 500 ml incubation media 1401-prf MenCM-prf 腦膜細胞培養(yǎng)基 500 ml
PlateCountAgar
EnterococcusfaecalisAgar
dragon牙膏稀釋緩沖液 250g 用于牙膏稀釋的稀釋液MYP瓊脂基礎MYPagarbase250克蠟樣芽孢桿菌的固體平板計數 進口分裝 麗絲胺羅丹明B/酸性紅52/磺酰羅丹明B Sulforhodamine B : 3520-42-1 質量規(guī)格: BS
克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基ChristensenCitrateMedium250克腸桿菌鑒別 進口分裝 D-蟲鹽;D-鹽 D-Luciferin sodium salt : 103404-75-7 質量規(guī)格: >98%
LBLennox肉湯LBLennoxBroth250克大腸桿菌增殖 進口分裝 Dabigatran etexilate : 211915-06-9 質量規(guī)格: >97%
PALCAM瓊脂PALCAMAgar250克單增李氏菌的選擇性分離 進口分裝 Dobutamine HCL : 49745-95-1 質量規(guī)格: BR,細胞培養(yǎng)級,純度大于99%,USP29XCL1 Others Canine 狗 XCL1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
CM-R071大鼠輸尿管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠間充質干細胞-骨髓RMSC
非洲綠猴腎細胞;VERO-76 惡性胚胎橫紋肌瘤,RD細胞 KP-N-NS(腎上腺神經母細胞瘤細胞(腦轉移))
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0926
FLRT3 Others Human 人 FLRT3 人細胞裂解液 (陽性對照)
赤點石斑魚神經壞死病毒PCR檢測試劑盒BacterialL-growingBroth
Deoxycholate lactose agar 脫氧膽鹽乳糖瓊脂 1.02894.0500 MERCK默克 incubation media Deoxycholate lactose agar 脫氧膽鹽乳糖瓊脂 1.02894.0500 MERCK默克
緩沖蛋白胨水(緩沖胨水增菌液)(BPW) 250g 用于沙門氏菌、阪崎腸桿菌的前增菌培養(yǎng)
Balb/c小鼠骨髓間質干細胞成脂誘導分化培養(yǎng)基Balb/cmousebonemarrowmesenchymalstemcellsintotheculturemediuminduceddifferentiationoffat
UVM添加劑 1ml*5支 添加到HB4195中,用于李氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)平底發(fā)光板 進口分裝 小鼠補體蛋白4(C4)ELISA試劑盒
培養(yǎng)瓶 進口分裝 小鼠白介素3(IL-3)ELISA試劑盒
深孔板 進口分裝 小鼠β細胞素(BTC)ELISA試劑盒
WHB Western Blot抗體孵育盒 進口分裝 小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) HA 人細胞裂解液 (陽性對照)
人毛細胞HHDPC
KMML1 小白鼠肺成纖維樣細胞
CM-H075人腎足突細胞*培養(yǎng)基100mL
QBC-939, 人膽管癌細胞
人惡性多發(fā)性畸胎瘤細胞;ERA-2 人小梁網細胞*培養(yǎng)基 100mL
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
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