DNA氣溶膠污染去除劑

描述：氣溶膠是懸浮于氣體介質(zhì)中粒徑一般為 1 nm ~ 1 mm 的固體、液體微小粒子形成的膠溶狀態(tài)散體系，其分 散并懸浮在氣體介質(zhì)中的核酸聚合物，廣泛存在于實(shí)驗(yàn)室 桌面、儀器、耗材以及空氣中。 DNA 氣溶膠與核酸擴(kuò)增過程（PCR、LAMP 等）相 伴相生。空氣與液體面摩擦、離心機(jī)離心、劇烈地?fù)u動(dòng)反 應(yīng)管、PCR 開蓋、移液器的反復(fù)吸樣、污染物的外泄等 途徑，都會(huì)產(chǎn)生 DNA 氣溶膠。分子實(shí)驗(yàn)室作為科研和臨 床檢驗(yàn)場(chǎng)所，PCR（或 LAMP）的使用頻率較高，且樣本 和擴(kuò)增目標(biāo)經(jīng)常出現(xiàn)多批次相同的情況，DNA 氣溶膠污 染在實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)不斷累積，污染風(fēng)險(xiǎn)不斷增加，假陽(yáng)性的 發(fā)生頻率也越來越高。PCR 等技術(shù)的高擴(kuò)增效率，產(chǎn)生 的核酸氣溶膠污染，會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性。假陽(yáng)性意 味著實(shí)驗(yàn)不可信，并且直接造成實(shí)驗(yàn)室經(jīng)濟(jì)損失。更嚴(yán)重 的是，如果形成氣溶膠污染，則可引起整個(gè) PCR 實(shí)驗(yàn)室 的污染，甚至要關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室。 由于 DNA 高耐熱性、高吸附能力、對(duì)有機(jī)溶劑的高 耐受性特點(diǎn)，無論采用高壓滅菌、清水沖洗、酒精擦洗均 不能去除 DNA 污染。 全新開發(fā)的強(qiáng)力核酸 酶（DNA Cleaning 酶），可在室溫 15min 內(nèi)將 DNA 污染物降解為 2-6 bp 的寡核苷酸，無論是移液器、PCR 儀、耗材、實(shí)驗(yàn)室桌面上的 DNA 吸附污染物均被酶解。 DNA 被酶解后，DNA Cleaning 酶可在 60℃烘干 10min 或者 70%酒精擦拭后不可逆失活，從而避免后續(xù)對(duì)實(shí)驗(yàn) 的影響。該制品不含任何有機(jī)毒性溶劑，無毒、無腐蝕性， 不對(duì)設(shè)備造成任何損傷。

 儲(chǔ)存： -20℃可保存 3 年。 

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。