瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒 ( 磁珠法）

保存條件：本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果。

產(chǎn)品介紹：

  瓊脂糖凝膠電泳是一種用于分離純化DNA片段的重要分子生物學(xué)實驗技術(shù)。本試劑盒中的溶膠液可以溶解由TAE或TBE電泳緩沖液制備的瓊脂糖凝膠塊，從凝膠塊中溶解的DNA片段可以特異性地吸附到硅基化磁珠的表面，在磁場的作用下，攜帶DNA的磁珠向磁鐵方法進行定向移動和聚集，與剩余的其它雜質(zhì)分開。通過簡單的兩次洗滌，可以將雜質(zhì)洗盡。最后用水或低鹽緩沖液將結(jié)合在磁珠上的DNA洗脫下來，純化的DNA可用于測序、酶切、標(biāo)記和克隆等多種下游實驗。該試劑盒可與核酸提取儀等工作站配套使用，可以簡單、快速地進行大規(guī)模核酸提取，達(dá)到降低工作量和提高工作效率的目的。

產(chǎn)品特點：

1.磁珠之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。

2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘鈉和高氯酸鹽，不影響后續(xù)下游實驗。

3.溶膠液為黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測pH值變化從而達(dá)到結(jié)合效果，大大提高回收效率。

自備儀器及試劑：小型離心機、水浴或金屬浴加熱塊、磁力架()、震蕩器、無水乙醇

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達(dá)量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應(yīng)時設(shè)計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進行設(shè)計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。