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技術(shù)原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌型PCR檢測試劑盒廠家 | Clostridium perfringens types AAPCR | BK-P9009 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
球擬圓酵母 Torulopsis globosa酸球菌 Lactococcus lactis
玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基 規(guī)格: 250g 用途: 供藥品和生物制品中霉菌和酵母菌的計數(shù)、分離和培養(yǎng)用。
香菇 Lentinula edodes豌豆瘤菌 Rhizobium leguminosarum
緩沖葡萄糖蛋白胨水/Buffer Glucose Peptone Water腸桿菌科細菌的甲基紅-VP試驗100克國產(chǎn)/進口
A-427(人肺細胞)5×106cells/瓶×2
改良的Mc Bride瓊脂MMA 規(guī)格: 250g 用途: 用于單核細胞增生李斯特氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB/T4789.30-2003,SN0184-93)。
鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti
細菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基/Total Genes Chromogenic Medium檢測細菌總數(shù),培養(yǎng)24小時,細菌顯紅色250毫升國產(chǎn)/進口
蛋白激酶Cδ(PKCδ)重組蛋白英文名稱:Recombinant Protein Kinase C Delta (PKCd)
哥倫比亞CAN瓊脂基礎/Columbia CAN Agar Base分離革蘭氏陽性球菌250克國產(chǎn)/進口
大豆慢生瘤菌裂褶菌
產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌型PCR檢測試劑盒廠家卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎 規(guī)格: 250g 用途: 用于厭氧梭狀芽孢桿菌的分離培養(yǎng)和卵磷脂酶試驗(GB/T 8538-2008,GB/T4789.28-2003中4.68,GB/T4...
UL16結(jié)合蛋白2(ULBP2)重組蛋白 Recombinant UL16 Binding Brotein 2 (ULBP2)
鈣結(jié)合蛋白(CR)重組蛋白 Recombinant Calretinin (CR)
磷脂酶A1(PLA1)重組蛋白 Recombinant Phospholipase A1 (PLA1)
細胞間粘附分子5(ICAM5)重組蛋白 Recombinant Intercellular Adhesion Molecule 5 (ICAM5)
AsPC-1(人胰腺細胞)5×106cells/瓶×2
SHG-44 (人膠質(zhì)瘤細胞)5×106cells/瓶×2
NCI-H1703(人肺鱗細胞)5×106cells/瓶×2
人肝細胞 Huh-7
人肺上皮細胞 L132
指示選擇性培養(yǎng)基基礎炭疽桿菌的分離鑒別250克國產(chǎn)/進口
青霉素敏感紙片炭疽桿菌檢測用配套試劑20片國產(chǎn)/進口
哥倫比亞血瓊脂基礎/Columbia Blood Agar Base各種細菌的基礎培養(yǎng)基250克國產(chǎn)/進口
Nitsch培養(yǎng)基/Nitsch MediumBR10升國產(chǎn)/進口
人淋巴成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠腎實質(zhì)細胞*培養(yǎng)基100mL