樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

準(zhǔn)備并添加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品（50μL）
準(zhǔn)備并添加葡萄糖分析工作溶液（50μL）
在37°C孵育10-30分鐘
檢測(cè)OD值=570nm左右的吸光度

溶液配制

1.儲(chǔ)備溶液配制

       除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1Amplite 紅色儲(chǔ)備液（250X）：
將100μLDMSO（組分E）加入到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中。應(yīng)立即使用原液。任何剩余的溶液應(yīng)等分并在-20℃重新冷凍。注意：避免反復(fù)凍融循環(huán)。注意：在硫醇如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰基*醇存在下，Amplite Red底物不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT或2-巰基*醇的濃度應(yīng)不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應(yīng)應(yīng)在pH 7-8下進(jìn)行。建議使用提供的分析緩沖液（pH 7.4）。

1.2辣根過(guò)氧化物酶（HRP）儲(chǔ)備液（10 U / mL）：
將1mL測(cè)定緩沖液（組分B）加入到辣根過(guò)氧化物酶（組分C）的小瓶中。注意：未使用的HRP溶液應(yīng)分為單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

1.3葡萄糖氧化酶溶液（100 U / mL）：
將1mL測(cè)定緩沖液（組分B）加入葡萄糖氧化酶（組分D）的小瓶中。注意：未使用的葡萄糖氧化酶溶液應(yīng)分為一次性等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

1.4葡萄糖原液（800mM）：
將1mL測(cè)定緩沖液（組分B）加入葡萄糖小瓶（組分F）中。注意：未使用的葡萄糖溶液應(yīng)分為單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

2.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
通過(guò)將適量的800mM葡萄糖儲(chǔ)備溶液稀釋到測(cè)定緩沖液（組分B）中來(lái)制備葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，以產(chǎn)生30μM的葡萄糖濃度。 然后在測(cè)定緩沖液（組分B）中進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋?zhuān)玫郊s10,3,1,0.3,0.1和0.03μM連續(xù)稀釋的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品。 包括非葡萄糖緩沖液對(duì)照作為空白對(duì)照。

3.工作溶液配制

表1.一個(gè)透明底96孔微孔板的分析工作溶液（2X）