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更新時(shí)間:2025-03-14 16:51:09瀏覽次數(shù):412次
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儀器類型 | 其它 | 貨號(hào) | GOY-01X0672 |
組織來源 | 雞卵泡組織 | 生長特性 | 貼壁 |
規(guī)格 | 5×10? | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
規(guī)格 | 5×10? | 貨號(hào) | GOY-01X0672 |
包裝 | T25培養(yǎng)瓶 | 分類 | 雞原代細(xì)胞 |
生長特性 | 貼壁 | 組織來源 | 雞卵泡組織 |
培養(yǎng)基含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率每2-3天換液一次
生長特性貼壁
細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣
傳代特性可傳1代
消化液0.25%
雞卵泡顆粒分離自雞卵泡組織;成熟卵泡是卵巢的組織結(jié)構(gòu)成分之一,卵泡腔很大,卵丘很明顯。卵泡內(nèi)膜細(xì)胞緊靠卵泡顆粒層,與顆粒層細(xì)胞之間有一層基膜相隔,內(nèi)膜細(xì)胞呈多邊形,胞質(zhì)清亮,胞核圓形,細(xì)胞間可見許多毛細(xì)血管,外膜細(xì)胞位于最外層,多呈梭形,與周圍結(jié)締組織分界不明顯。卵泡(follicle)中卵母細(xì)胞四周有一層菱形或扁平細(xì)胞圍繞,在卵泡開始發(fā)育、卵細(xì)胞成長的同時(shí),周圍的菱形細(xì)胞變?yōu)榱⒎叫危⒂蓡螌釉錾蓮?fù)層,因其細(xì)胞漿內(nèi)含有顆粒,故稱為顆粒細(xì)胞。初級卵泡的顆粒細(xì)胞為單層;次級卵泡的顆粒細(xì)胞增至復(fù)層;成熟卵泡的顆粒細(xì)胞展開又變?yōu)閱螌?。顆粒細(xì)胞的胞核大而圓,著色深,細(xì)胞的游離面有許多細(xì)長突起伸入放射帶的凹陷部。
方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的雞卵泡顆粒采用先機(jī)械分離后膠原酶 - 聯(lián)合消化法、并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實(shí)驗(yàn)室分離的雞卵泡顆粒經(jīng)FSHR免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
一、細(xì)胞培養(yǎng)
1取材 在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞(視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?,?jīng)過一定的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。2培養(yǎng) 將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。3凍存及復(fù)蘇(可參閱后面有關(guān)章節(jié))為了保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,最終保存于液氮中。在極低的溫度下,細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無限的。復(fù)蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。
二、原代細(xì)胞分離
凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。1懸浮細(xì)胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。2實(shí)體組織材料的分離方法對于實(shí)體組織材料,由于細(xì)胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細(xì)胞充分分散,形成細(xì)胞懸液,可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。
三、細(xì)胞增殖檢測技術(shù)
目前主要有兩種用于檢測細(xì)胞增殖能力的方法。一種是直接的方法,通過直接測定進(jìn)行分裂
的細(xì)胞數(shù)來評價(jià)細(xì)胞的增殖能力。另一種是間接的方法,即細(xì)胞活力(cell viability)檢測方法,通過檢測樣品中健康細(xì)胞的數(shù)目來評價(jià)細(xì)胞的增殖能力。顯然,細(xì)胞活力檢測法并不能最終證明檢測樣品中的細(xì)胞是否在增殖。如細(xì)胞在某一培養(yǎng)條件下會(huì)自發(fā)啟動(dòng)凋亡程序,但藥物的干擾可抑制凋亡的發(fā)生;這時(shí)若采用細(xì)胞活力檢測法,顯然可以區(qū)分兩種條件下的細(xì)胞數(shù)量,但我們并不能從藥物干擾組細(xì)胞數(shù)大于對照組的事實(shí)說明藥物可促進(jìn)細(xì)胞增殖的結(jié)論。所以最直接的證據(jù)應(yīng)該采用方法一。
取材:首先,用培養(yǎng)液濕潤所取的組織材料,并用鋒利的眼科剪去除附在其上的脂肪和結(jié)締組織。接著用平衡液(如PBS或Hanks液)漂洗,再用眼科彎剪將組織塊剪成小塊。多次用PBS或Hanks液漂洗,直到液體清亮、無油滴為止。
接種:用濕潤的吸管吸取切碎的組織塊,輕輕吹到培養(yǎng)瓶皿中,并按一定間距均勻放在培養(yǎng)瓶底壁上。注意不要過多,確保組織塊切面貼在培養(yǎng)瓶底壁上。
培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn),使瓶底朝上,在種植了組織塊一側(cè)的對側(cè)面加足培養(yǎng)液,避免組織塊與培養(yǎng)液接觸,然后塞緊瓶塞。將種植了組織塊的一側(cè)朝上,靜置于37℃培養(yǎng)箱中。待組織塊貼壁1到3小時(shí)后翻瓶,使貼壁的組織塊浸沒在培養(yǎng)液中,繼續(xù)靜置。換液:每隔2到3天更換一次培養(yǎng)液,或者根據(jù)培養(yǎng)瓶種顏色的變化確定換液時(shí)間。
一、原代細(xì)胞計(jì)數(shù)
將血球計(jì)數(shù)板及蓋片用擦試干凈,并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板上。
將細(xì)胞懸液吸出少許,滴加在蓋片邊緣,使懸液充滿蓋片和計(jì)數(shù)板之間。
靜置3分鐘。
鏡下觀察,計(jì)算計(jì)數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù),壓線細(xì)胞只計(jì)左側(cè)和上方的。然后按下式計(jì)算:
細(xì)胞數(shù)/ml=4大格細(xì)胞總數(shù)/ 4×10000
注意:鏡下偶見由兩個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算,若細(xì)胞團(tuán)占10%以上,說明分散不好,需重新制備細(xì)胞懸液。
二、原代細(xì)胞活力
將細(xì)胞懸液以0.5ml加入試管中。
加入0.5ml 0.4%臺(tái)盼蘭染液,染色2一3分鐘。
吸取少許懸液涂于載玻片上,加上蓋片。
鏡下取幾個(gè)任意視野分別計(jì)死細(xì)胞和活細(xì)胞數(shù),計(jì)細(xì)胞活力。
死細(xì)胞能被臺(tái)盼蘭染上色,鏡下可見深蘭色的細(xì)胞,活細(xì)胞不被染色,鏡下呈無色透明狀。
活力測定可以和細(xì)胞計(jì)數(shù)合起來進(jìn)行,但要考慮到染液對原細(xì)胞懸液的加倍稀釋作用。
人卵巢癌組織源細(xì)胞 | Human 5-Hydroxytryptamine,5HT ELISA Kit |
小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞 | 大鼠1,4,5-三磷酸肌醇ELISA檢測試劑盒說明 |
大鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞 | 胸腺依賴性抗原(TD-Ag)檢測試劑盒 |
人膽管癌組織源細(xì)胞 | 犬CC趨化因子受體2ELISA檢測試劑盒說明 |
小鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞 | 羊原代脾臟NK原代細(xì)胞 |
大鼠胸腺上皮細(xì)胞 | 多巴胺鹽酸鹽62-31-7 |
人腎癌組織源細(xì)胞 | 小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)elisa試劑盒 |
小鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞 | 構(gòu)巢曲霉說明書 |
大鼠胸腺淋巴細(xì)胞 | 乙酰微小桿菌說明書 |
人膀胱癌組織源細(xì)胞 | 猴原代脾臟白原代細(xì)胞 |
小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞 | Mouse Interleukin 5,IL-5 ELISA KIT |
大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞 | 大鼠15脂加氧酶ELISA檢測試劑盒圖片 |
人甲狀腺癌組織源細(xì)胞 | 偶氮二氰基戊酸2638-94-0 |
小鼠嗅球神經(jīng)元細(xì)胞 | 雞卵泡顆粒細(xì)胞小鼠(SS)elisa酶聯(lián)免疫試劑盒價(jià)格 |
大鼠椎間盤髓核細(xì)胞 | 綿羊白介素1β(IL-1β)elisa試劑盒 |
人乳腺癌組織源細(xì)胞 | 血鏈球菌說明書 |
小鼠椎間盤髓核細(xì)胞 | Rat Glycogen phosphorylase MM,GP-MM ELISA Kit |
大鼠視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞 | 人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)elisa試劑盒 |
小鼠胸腺上皮細(xì)胞 | 小鼠硫氧化還原蛋白(Trx)elisa酶聯(lián)免疫試劑盒價(jià)格 |
大鼠脂肪干細(xì)胞 | 虎原代外周血和臍帶血DC原代細(xì)胞 |
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