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蛋白鹽析影響因素

2010年09月26日 17:12:05人氣:2226來源:上海酶聯(lián)生物研究所

1. 蛋白質(zhì)的濃度:
  中性鹽沉淀蛋白質(zhì)時,溶液中蛋白質(zhì)的實(shí)際濃度對分離的效果有較大的影響。通常高濃度的蛋白質(zhì)用稍低的硫酸銨飽和度即可將其沉淀下來,但若蛋白質(zhì)濃度過高,則易產(chǎn)生各種蛋白質(zhì)的共沉淀作用,除雜蛋白的效果會明顯下降。對低濃度的蛋白質(zhì),要使用更大的硫酸銨飽和度,但共沉淀作用小,分離純化效果較好,但回收率會降低。通常認(rèn)為比較適中的蛋白質(zhì)濃度是2.5%~3.0%,相當(dāng)于25 mg/mL~30mg/mL。
2. 離子強(qiáng)度:
      各種蛋白質(zhì)的沉淀要求不同的離子強(qiáng)度。
3. 鹽的性質(zhì):
      zui有效的鹽是多電荷陰離子。
4. PH值:
  一般說來,蛋白質(zhì)所帶凈電荷越多,它的溶解度就越大。改變pH值可改變蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì),因而就改變了蛋白質(zhì)的溶解度。遠(yuǎn)離等電點(diǎn)處溶解度大,在等電點(diǎn)處溶解度小,因此用中性鹽沉淀蛋白質(zhì)時,pH值常選在該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)附近。
5. 溫度:
  除對溫度敏感的蛋白質(zhì)在低溫(4度)操作外,一般可在室溫中進(jìn)行。一般溫度低蛋白質(zhì)溶介度降低。但有的蛋白質(zhì)(如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白)在較高的溫度(25度)比0度時溶解度低,更容易鹽析。
6. 蛋白質(zhì)沉淀后宜在4℃放3小時以上或過夜,以形成較大沉淀而易于分離。鹽析時,分子量較小的蛋白質(zhì)逐步沉淀下來可能就值得懷疑。具體的蛋白需要具體的摸索,當(dāng)然,對肽來說,結(jié)論也是一樣的。

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上海酶聯(lián)生物研究所作者

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