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蛋白芯片技術(shù)的應(yīng)用研究存在的問題及應(yīng)用前景

2010年11月20日 09:42:19人氣:1878來源:上海源葉生物科技有限公司

目前,學(xué)者們正在開展有關(guān)蛋白芯片技術(shù)應(yīng)用的研究,Holt等利用蛋白芯片技術(shù)篩選能夠相互結(jié)合的特異抗體抗原成分,他們利用12種表達(dá)較強(qiáng)但尚未接觸任何抗原的抗體片段篩選含有27 648種人胎腦蛋白的蛋白芯片,從中找出了4組高度特異性的抗原(蛋白)抗體復(fù)合物,其中有3種抗體結(jié)合的蛋白質(zhì)功能未明,但是由于表達(dá)水平都較低,說明這種抗原抗體的結(jié)合技術(shù)是一種具有較高特異性和敏感性的篩選方法,可以用于高通量篩選分離各種不同的抗體成分,或檢測基因的表達(dá)和蛋白分子間的相互作用,這將有助于對某些疾?。ò[瘤)的發(fā)病分子水平機(jī)制的研究,以及協(xié)助尋找疾病診斷和治療的靶分子。根據(jù)蛋白芯片技術(shù)的基本原理,可以將不同的抗體固定于載體上成為抗體蛋白芯片,用于檢測不同組織產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。

Ge在蛋白質(zhì)的相互作用的研究中,采用了一種通用的蛋白質(zhì)芯片系統(tǒng),該系統(tǒng)敏感有效,用途廣泛,可定量測定及重復(fù)使用,而且操作簡易。Gavin等應(yīng)用蛋白芯片技術(shù)觀察代謝過程有關(guān)作用物和酶的相互作用關(guān)系。他們選擇3對蛋白激酶與作用物系統(tǒng),即依賴3,,5,—磷酸蛋白激酶—Kemptide;酪蛋白激酶Ⅱ—蛋白質(zhì)磷酸酶抑制因子2和p42促有絲分裂劑激活蛋白(MAP)激酶(ErK2)—ElKl,首先將各系統(tǒng)的作用物按順序固定于3張BSA-NHS玻片上,分別在有核素7-s’PATP的環(huán)境中與不同蛋白激酶溫浴,然后,玻片經(jīng)用乳劑處理后可在光學(xué)顯微鏡下觀察到各種蛋白激酶催化特異的作用物產(chǎn)生磷酸化反應(yīng)。其結(jié)果提示蛋白芯片技術(shù)可以應(yīng)用于作用物與酶相互作用的研究及代謝機(jī)制的分析。

Gavin等還在蛋白芯片技術(shù)研究過程通過DIG、*和合成的六氫毗喧酮胺(即APl497)等3種具有對應(yīng)的蛋白受體的小分子特質(zhì),研究蛋白的受體蛋白按順序固定的相互作用。他們首先將3種小分子物質(zhì)的受體蛋白按順序固定于同一載體上并制備成相同的4張蛋白芯片,將BSA分別用不同的熒光物質(zhì)(Alexa488、Cy3或Cy5)標(biāo)記,并分別與DIC、*和AP 1 497等3種小分子物質(zhì)結(jié)合成為探針,用每一種具有不同熒光標(biāo)記的探針作用的芯片,結(jié)果只有能與小分子對應(yīng)的受體蛋白被標(biāo)上熒光。上述結(jié)果說明使用的熒光劑之間沒有交叉的熒光激發(fā)和發(fā)光作用。因此,將3種標(biāo)記探針混合后作用于蛋白芯片,則可使3種不同的受體蛋白同時(shí)標(biāo)記上不同的熒光。研究結(jié)果提示蛋白芯片技術(shù)對于新藥的發(fā)掘是十分有用的,因?yàn)樗鼘ふ倚滤幾饔玫陌悬c(diǎn)非常方便。

雖然目前已經(jīng)成功地制出了第1張具有高通量分析平臺作用的蛋白芯片,通過適當(dāng)?shù)募夹g(shù)處理可以使點(diǎn)樣蛋白保持天然的構(gòu)象和生物學(xué)活性。但是,利用蛋白芯片技術(shù)對于蛋白質(zhì)功能的研究仍然存在著種種問題,例如目前大多數(shù)來自于cDNA文庫的克隆體系不能通過正確的閱讀框架編碼蛋白質(zhì);或者不能正確表達(dá)產(chǎn)生具有氨基酸全序列的蛋白分子;通過細(xì)菌表達(dá)的蛋白質(zhì)不能形成正常的空間構(gòu)象等,都將直接影響有關(guān)蛋白質(zhì)功能的研究。另外,為了方便種類繁多的蛋白質(zhì)的功能檢測和分析,通過不同途徑或方式獲取并用于制作蛋白芯片的蛋白質(zhì)必須首先經(jīng)過純化。正常和異常情況下蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用的差別都需要我們進(jìn)一步去探索。

綜上所述,高通量分析平臺蛋白芯片技術(shù)的建立將為蛋白質(zhì)功能及其相關(guān)的研究提供快速、高信息量和更為直接的研究方法,與其他的分子生物學(xué)分析方法相比,蛋白芯片技術(shù)具有快速、平行的*性。該方法的建立和應(yīng)用將有助于人類揭示疾病發(fā)生的分子水平的機(jī)制及尋找更為合理有效的治療手段和途徑。迄今為止,這一嶄新的技術(shù)仍存在一些缺陷,有待進(jìn)一步完善和發(fā)展。

 

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