上海源葉生物科技有限公司作者
熒光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immunoassay,F(xiàn)PIA)是一種定量免疫分析技術(shù),其基本原理是熒光物質(zhì)經(jīng)單一平面的藍(lán)偏振光(485nm)照射后,吸收光能躍入激發(fā)態(tài),隨后回復(fù)至基態(tài),并發(fā)出單一平面的偏振熒光(525nm)。偏振熒光的強(qiáng)弱程度與熒光分子的大小呈正相關(guān),與其(受激發(fā)時(shí))轉(zhuǎn)動的速度呈反相關(guān)。FPIAzui適宜檢測小至中等分子物質(zhì),常用于藥物、激素的測定。
FPIA采用競爭反應(yīng)的原理,在缺乏未標(biāo)記分析物(通常是待測樣品)時(shí)熒光信號zui強(qiáng);加入末標(biāo)記分析物后,在已標(biāo)記和未標(biāo)記樣品之間的競爭將減弱熒光信號。熒光信號強(qiáng)度與游離的分析物的濃度成正比,與待測樣品中未標(biāo)記分析物的濃度成反比。通過測定一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)晶,繪制競爭結(jié)合抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)曲線比較而得到定量值。以測定半抗原藥物的濃度為例,反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi)除待測藥物外,同時(shí)加入一定量用熒光物質(zhì)標(biāo)記的相應(yīng)藥物(小分子),二者與有*的特異性抗體(大分子)競爭結(jié)合。當(dāng)待測藥物濃度高時(shí),經(jīng)過競爭,與大部分抗體結(jié)合,而標(biāo)記藥物則呈游離的小分子狀態(tài),因此在液相中轉(zhuǎn)動速度較快,測得的偏振熒光強(qiáng)度也較低。反之,待測藥物濃度低時(shí),大部分標(biāo)記藥物與抗體結(jié)合,形成大分子的標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物,在液相中轉(zhuǎn)動速度較慢,此時(shí)檢測到的偏振熒光強(qiáng)度也較高。測定反應(yīng)系統(tǒng)的偏振光大小,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可地得知樣品中待測藥物的相應(yīng)含量。
FPIA法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高,例如測定Digoxin的靈敏度可達(dá)0.2ng/m1,精密度高、速度快、操作簡便,樣品用量少,儀器不需要每日校準(zhǔn)。缺點(diǎn)是儀器設(shè)備昂貴,藥品試劑盒專屬性強(qiáng),需進(jìn)口。
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