| 上海宇淳生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
聯(lián)系電話
13061909058
| 參考價 | ￥470 |
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型號
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品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 24T | 470元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-05-31 10:31:35瀏覽次數(shù)：347
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土壤核酸酶活性測定試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 1 土壤核酸酶活性測定試劑盒說明書 （貨號：WS3430F 分光法 24 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 核酸是土壤有機磷的組分之一，在核酸酶的作用下，核酸經(jīng)過多步分解最終釋放出無 機磷，水解產(chǎn)物是植物的磷源之一。土壤核酸酶的活性通過度量土壤核苷酸酶的活性測得。 土壤核酸酶即土壤核苷酸酶通過水解底物核糖核苷酸生成無機磷和其他物質(zhì)，無機磷在 酸性環(huán)境中與鉬酸銨反應(yīng)生成藍色復(fù)合物，通過在 700nm 處檢測該有色物質(zhì)的生成速率 即可計算土壤核酸酶活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 35mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部，再 加入 30mL 試劑一，充分溶解備用， 試劑三 液體 25mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部，再 加入 5mL 蒸餾水，充分溶解備用。 試劑六 粉劑 mg×3 支 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部，每 支再加入 1.5mL 蒸餾水，現(xiàn)配現(xiàn)用。 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。 【注】：全程操作需無磷環(huán)境；試劑配置用新的槍頭和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿， 避免磷污染。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋， 可調(diào)式移液器。 四、土壤核酸酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣本情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣風(fēng)干或者 30℃烘箱風(fēng)干，先粗研磨，過 40 目篩，備用。 【注】：土壤風(fēng)干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細(xì)膩； 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 700nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土壤樣本（g） 0.1 0.1 試劑二 500 混勻，37℃振蕩培養(yǎng) 2h（間隔 30min 振蕩混勻一次） 試劑三 500 500 試劑二 500 立即混勻，于 12000rpm，室溫或 4℃離心 10min，本試劑盒僅供科研使用 2 上清液需立即測定，不可久置。 ③ 顯色反應(yīng)，在 EP 管中依次加入： 上清液 160 160 試劑四 400 400 試劑五 80 80 試劑六 80 80 混勻，室溫靜置 10min，全部液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃 比色皿(光徑 1cm)中，于 700nm 處讀取吸光值 A， △A=A 測定-A 對照（每個樣本需做一個自身對照）。 【注】：若△A 值在零附近徘徊，可在 37℃孵育階段延長反應(yīng)時間 T(如增至 3h 或更長)，或增加 土壤樣本量 W（如增至 0.2g），則改變后的反應(yīng)時間 T 和 W 需代入公式重新計算。 五、結(jié)果計算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 1.0031x - 0.0016，x 是標(biāo)準(zhǔn)品摩爾濃度（μmoL/mL）, y 是△A。 2、酶活定義：37℃條件下，每克土樣每小時釋放出 1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。 土壤核酸酶活性(μmol/h/g 土樣)=(△A+0.0016)÷1.0031×V1÷W÷T =0.5×(△A+0.0016)÷W V1---孵育階段的反應(yīng)總體積，1mL； T---反應(yīng)時間，2h； W---樣本質(zhì)量，g； 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（5μmoL/mL）：標(biāo)準(zhǔn)品用 10mL 蒸餾水溶解。（母液需在兩天內(nèi)用）。 2 把母液用試劑一稀釋成六個濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmoL/mL。也 可根據(jù)實際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)顯色反應(yīng)階段測定管的加樣體系操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
