| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥650 |
-
型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 24T | 650元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-06-12 11:06:25瀏覽次數(shù)：313
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乙酰乳酸合成酶（ALS）活性試劑盒
乙酰乳酸合成酶（ALS）活性試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 1 乙酰乳酸合成酶（Acetolactate synthase, ALS）活性測定試劑盒 （貨號：WS2440F 分光法 24 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 乙酰乳酸合成酶( ALS，EC 2.2.1.6) 是支鏈氨基酸生物合成途徑中的一個關(guān)鍵酶，此生 物合成過程只存在于植物和微生物體內(nèi)，是綠色除草劑的重要作用靶標。 乙酰乳酸合成酶( ALS)可催化 2 分子的丙酮酸生成乙酰乳酸，該產(chǎn)物在硫酸作用下脫羧 生成乙酰甲基甲醇，該產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)生成有色物質(zhì)，該有色物質(zhì)在 525nm 處有特征 吸收峰，通過檢測該有色物質(zhì)的增加速率即可得出 ALS 酶活性大小。 反應(yīng)方程式：2 pyruvate =2-acetolactate+CO2。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉體 mg×1 支 4℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底 部，再加 1.2mL 蒸餾水混勻 溶解，仍 4℃保存。 試劑二 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 2mL×1 支 4℃保存 試劑四 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉體×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液 器、研缽、蒸餾水。 四、乙酰乳酸合成酶（ALS）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本：取約 0.2g 組織（水分充足的樣本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，進行冰 浴勻漿，4℃×12000rpm 離心 15min，取上清液待測。 【注】:若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例提取 ② 細菌/細胞樣本：先收集細菌到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加 入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重 復(fù) 30 次）；12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長為 525nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 所有試劑于 25℃水浴中預(yù)熱 10 min。 ③ 在 EP 管中依次加入下列試劑： 試劑名稱（μL） 樣本管 對照管 試劑一 40本試劑盒僅供科研使用 2 試劑二 260 300 樣本 100 100 35℃條件下，暗反應(yīng) 1h 試劑三 40 40 60℃條件下水浴脫羧 15min 試劑四 200 200 試劑五 200 200 60℃下水浴顯色 15min，12000rpm 離心 5min，取澄清 上清液至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm），于 525nm 處 讀值。ΔA=A 測定-A 對照（每個樣本做一個自身對照）。 【注】：若ΔA 的值非常低在零附近，可增加樣本量 V1（如增至 200μL，則試劑二相應(yīng)減少） 或延長反應(yīng)時間 T（如增至 2h 或更長），則重新調(diào)整的 V1 和 T 代入公式重新計算。 五、結(jié)果計算： 1、標準曲線：y = 0.0156x + 0.0023，x 是標準品乙酰甲基甲醇摩爾質(zhì)量（nmol）；y 是△A。 2、按照樣本質(zhì)量計算： 酶活定義：每克組織每小時催化底物產(chǎn)生 1nmol 乙酰甲基甲醇定義為一個酶活單位。 ALS (nmol/h/g 鮮重)=[(△A-0.0023)÷0.0156]÷(W×V1÷V)÷T×D=641×(△A-0.0023)÷W×D 3、按照樣本蛋白濃度計算： 酶活定義：每毫克蛋白每小時催化底物產(chǎn)生 1nmol 乙酰甲基甲醇定義為一個酶活單位。 ALS (nmol/h/mg prot)=[(△A-0.0023)÷0.0156]÷(Cpr×V1)÷T×D =641×(△A-0.0023)÷Cpr×D 4、按細菌數(shù)量計算： 酶活定義：每 104個細胞每小時催化底物產(chǎn)生 1nmol 乙酰甲基甲醇定義為一個酶活單位。 ALS (nmol/h/104 cell)=[(△A-0.0023)÷0.0156]÷(500×V1÷V)÷T×D=1.28×(ΔA-0.0023)×D W---樣品質(zhì)量，g； V---提取液體積，1 mL； V1---上清液體積（mL），0.1mL； T---反應(yīng)時間，1h。 D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； 500---細胞數(shù)量，萬； Cpr---上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1mL 蒸餾水混勻溶解。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品：0，0.01，0.02，0.03，0.04，0.05 mg/mL。也 可根據(jù)實際樣本來調(diào)整標準品濃度。 3 依據(jù)對照管的加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標準曲線，標準品乙酰甲基甲醇的摩 爾質(zhì)量為 88.11。
