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上海西格生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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科研抗體的制備操作與注意要素

時(shí)間:2022/7/20閱讀:684
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抗體(antibody),(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,被免疫系統(tǒng)用來(lái)鑒別與中和外來(lái)物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中,及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面??贵w能識(shí)別特定外來(lái)物的一個(gè)*特征,該外來(lái)目標(biāo)被稱為抗原。

抗體的制備過(guò)程:

1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。

抗體的操作注意要素:

每次試驗(yàn)前應(yīng)列出詳細(xì)試驗(yàn)計(jì)劃,其中包含試驗(yàn)意圖、擬用方法、所用一抗和二抗的品種和效價(jià)、預(yù)施行的操作流程計(jì)劃以及預(yù)期試驗(yàn)結(jié)果等。試驗(yàn)分組編號(hào)用玻璃筆標(biāo)記在玻片上,對(duì)每一抗體均應(yīng)配以陽(yáng)性和陰性對(duì)照。關(guān)于抗體的操作過(guò)程要素:

1.抗體分裝購(gòu)人的濃縮型抗體,為防止重復(fù)凍融而失效,一般需要分裝在多個(gè)安瓿中,依據(jù)需要量,每安瓿含10一20rA。除留一支現(xiàn)用,其余應(yīng)立即放置低溫冰箱內(nèi)貯存(-20℃以下)。用時(shí)取一支。以免長(zhǎng)期保存在4℃冰箱內(nèi)失效。

2.無(wú)菌與消毒保持使用中的抗體無(wú)菌是困難的,但是與抗體接觸的東西如滴管、吸管、試管、安瓿以及加樣器等通過(guò)消毒,盡量削減污染的時(shí)機(jī).不然抗體極易污染細(xì)菌與真菌,然后敏捷發(fā)生渾濁沉積而失效。

3.抗體稀釋一般按其作業(yè)濃度稀釋,如1:100、1:1000等,然后用旋渦器混勻液體。剩余的抗體可保存在斗℃冰箱內(nèi).盡量在1—2個(gè)月內(nèi)用完,而不 要放在0℃以下。不然抗體會(huì)很快結(jié)冰,重復(fù)凍融可使抗體效價(jià)急劇下降。關(guān)于抗體的稀釋液,在夏天溫度很高時(shí),參加少許防腐劑如疊氮鈉或柳硫汞等,以免在切片上效果時(shí)間超過(guò)10小時(shí)而生真菌。



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